СПОСОБ РЕНТГЕНОДИАГНОСТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ЛИМФОМ

СПОСОБ РЕНТГЕНОДИАГНОСТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ЛИМФОМ


RU (11) 2021757 (13) C1

(51) 5 A61B6/00 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 10.08.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1994.10.30 
(21) Регистрационный номер заявки: 4713666/14 
(22) Дата подачи заявки: 1989.07.03 
(45) Опубликовано: 1994.10.30 
(56) Аналоги изобретения: Макарычева Р.И. Автореф. докторской диссертации. Поражение легких и плевры у больных лимфогранулематозами гематосаркомами. М.: 1983, с.24-30. 
(71) Имя заявителя: Нижегородский государственный медицинский институт 
(72) Имя изобретателя: Пенин С.В.; Тупицын Н.Н.; Алексеева Т.Р. 
(73) Имя патентообладателя: Пенин Сергей Витальевич; Нижегородский государственный медицинский институт 

(54) СПОСОБ РЕНТГЕНОДИАГНОСТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ЛИМФОМ 

Изобретение относится к области медицины, а именно к рентгенологии, касается способа рентгенодиагностики злокачественных лимфом. Целью изобретения является повышение точности диагностики -иммунологического подварианта неходжкинских лимфом. Способ заключается в том, что проводят рентгенографию органов грудной клетки, исследуют гематогенный путь распространения заболевания и при наличии одновременно теней увеличенных внутригрудных лимфатических узлов, одиночных или множественных очаговых теней в легких, усиления и деформации легочного рисунка и при наличии плеврита диагностируют Т-иммунологический подвариант неходжкинских лимфом. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к медицине, а именно к рентгенологии, и может быть использовано в онкологии для рентгенодиагностики Т-иммунологического подварианта неходжскинских лимфом.

Злокачественные лимфомы - собирательное понятие для обозначения всех нелейкемических опухолей кроветворной и лимфоидной ткани. Среди злокачественных лимфом выделяют лимфогранулематоз и неходжскинские лимфомы (НХЛ).

НХЛ начинаются в виде одиночного опухолевого узла, но в последующем с быстрым лимфогематогенным распространением процесса, представляют клинически разнородную группу при сходной морфологии. Для более тонкой идентификации НХЛ особенно важна иммунодиагностика. Использование панели моноклональных антител (МКА) в комплексном обследовании взрослых больных НХЛ позволяет выявить Т-клеточный, В- и "нулевой" иммунологические подварианты заболевания, различающиеся по клиническому течению заболевания, прогнозу и ответу на терапию. (Итоговая научная конференция ВОНЦ АМН СССР. Диагностика злокачественных новообразований. И., 1988, с. 68. А.Ю.Барышников).

Совершенствование методов современной терапии НХЛ приводит к необходимости все более точного распознавания клеток. Диагностика НХЛ основывается на определении доминирующей популяции бластных клеток костного мозга у больных с помощью цитохимических и морфологических методов. Однако общепринятые цитоморфологичесие методы не могут определить все многообразие подвариантов НХЛ. Иммунологические методы позволяют выявить гетерогенность в пределах морфологически и цитохимически однородной популяции клеток. Для лимфопролиферативных заболеваний, таких как НХЛ, составляющих клинически разнородную группу при сходной морфологии, иммунодиагностика особенно важна. От идентификации вида клеток, уровня их дифференцировки зависит выбор терапии и результат воздействия на клеточную популяцию при лечении (Барышников А.Ю. и др., 1985).

При использовании методов, позволяющих выявить Т- и В-маркеры лимфоидных клеток по содержащимся на мембранах рецепторам, стало возможным выявить первоначально Т-, В- и ни Т-, ни В-иммунологические варианты НХЛ.

Материал и методы для иммунодиагностики НХЛ.

1. Суспензия лимфоцитов (2х106 лф/мл), выделенных из исследуемой крови центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографин.

2. Мононуклеарные клетки костного мозга.

3. Лимфоциты из лимфатических узлов (ЛУ).

4. Гранулоциты.

Приготовление суспензии клеток.

I. Выделение мононуклеаров периферической крови.

1. Наслоить лейкоциты или кровь, разведенную на 1/3 средой 199, на градиент плотности фиколл-верографин (9 объемов крови на 3 объема градиента).

2. Центрифугировать при 1700 об/мин в течение 40 мин при комнатной температуре.

3. Собрать мононуклеары пастеровской пипеткой из интерфазы.

4. Клетки трижды отмыть средой 199. При этом 1-й раз центрифугировать в течение 20 мин при 1200 об/мин. Чистоту популяции контролировать подсчетом лимфоцитов в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе.

II. Клетки костного мозга можно выделить двумя методами: седиментацией эритроцитов в 1%-ном желатине и путем лизирования эритроцитов.

Реагенты.

1. Синтетическая среда 199 на растворе Хенкса для культур тканей изготовленная НИИ полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР, г. Москва или вирусных инфекций МЗ РСФСР г. Свердловск.

2. Моноклональные антитела, производства НИИЭиМ, г. Горький.

3. Культуральная жидкость миеломных клеток РЗх63Ад 8.653.

4. Ксеногенные антисыворотки.

5. Смесь фикол-верографин: 9% фикол 400000, 34% верографин (Югославия). Смесь готовят из 12 частей 9% фиколла и 5 частей 34% верографина. Плотность смеси 1,076 г/см3.

6. Поли-Л-лизин с мол.м. 150000-300000.

7. Парафильм.

8. Азид натрия. Готовят 2,5%-ный раствор азида натрия на физиологическом растворе. В сыворотки добавляют азид натрия до конечной концентрации 0,25%.

9. 50%-ный глицерин на физиологическом растворе.

10. 10%-ный раствор желатина.

11. Поливалентная и моноспецифические антисыворотки против иммуноглобулинов человека производства НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи.

12. Физиологический раствор рН 7,0-7,2.

13. Ф(ав)2-фрагменты из кроличьей сыворотки против глобулинов белой мыши.

Постановка непрямой реакции поверхностной иммунофлуоресценции на клетках, прикрепленных к стеклу с помощью поли-Л+лизина.

1. Прикрепить клетки к стеклу с помощью поли-Л-лизина (50 мкг/мл). На обезжиренное стекло прикрепить парафильм с проделанными в нем 12 отверстиями лунками. Нагреть стекло на пламени горелки для того, чтобы парафильм приклеился к стеклу и под него не подтекала сыворотка. Внести в лунки по 50 мкл поли-Л-лизина в концентрации 50 мкг/мл.

2. Поместить стекло в термостат при 37оС на 30 мин.

3. Отмыть стекло 2 раза в среде 199.

4. Внести в каждую лунку по 50 мкл -х106 кл/мл исследуемых клеток.

5. Инкубировать клетки в течение 45 мин при 37оС.

6. Отобрать среду из лунок. Внести в лунки по 50 мкл тестируемые антисыворотки или моноклональные антитела и инкубировать 30 мин при 4оС.

7. Отмыть клетки в гистологических стаканчиках 5 раз в растворе Хенкса или средой 199.

8. Нанести на клетки по 50 м/л люминесцирующих сывороток против глобулинов МКА или глобулинов ксеногенных антисывороток или Ф(ав)2-фрагменты.

9. Инкубировать клетки 30 мин при 0оС.

10. Отмыть клетки средой 199 5 раз.

11. Внести в лунки 50%-ный глицерин. Закрыть лунки покровным стеклом.

12. Учитывать свечение на флюоресцентном микроскопе при увеличении объектива х 90-х 100, окуляра 2,5-10 под масляной иммерсией.

В препарате просчитывать 200-300 клеток.

К недостаткам известного способа относится следующее.

1. Необходимость создания специальной лаборатории и специально обученного штата лаборантов врачей.

2. Трудоемкость, сложность метода иммунодиагностики.

3. Длительность постановки реакции (в течение всего рабочего дня).

4. Дорогой метод (использование дорогостоящих, в том числе, импортных препаратов).

5. Травматичность (для постановки реакции необходимо получить исследуемый материал: биопсия лимфатического узла, органа, пункция костного мозга, в/в забор крови).

Способ, выбранный в качестве прототипа, заключается в том, что при рентгенографии пучок рентгеновского излучения, проходя через органы грудной клетки, поглощается ими не в одинаковой степени и на выходе становится неоднородным. Такой пучок, попадая на рентгенографическую пленку, обусловливает возникновение теневого рентгеновского изображения исследуемых органов грудной клетки.

Фиксированное изображение характеризует внутреннее строение и состоит из светлых и более темных участков. Интенсивные тени на экране соответствуют плотным органам и тканям, поглотившим значительное количество излучения, а более светлые тени относятся к менее плотным образованиям или органам, содержащим газ, т.е. изображение является позитивным. На рентгенограммах соотношение затемнений и просветлений обратное (негативное изображение).

Недостатками способа является:

1. Статичность изображения.

2. Плоскостное изображение.

3. Длительность обработки пленки (15 мин).

4. Невозможность постановки точного диагноза Т-подварианта неходжкинских лимфом. Точность рентгенографии грудной клетки составляет 68,5%.

Целью изобретения является повышение точности диагностики Т-иммунологического подварианта неходжкинских лимфом.

Поставленная цель достигается тем, что в способе включающем рентгенографию органов грудной клетки, исследуют гематогенный путь распространения заболевания: при наличии одновременно одиночных или множественных очаговых теней в легких, усилении и деформации легочного рисунка, увеличении внутригрудных лимфатических узлов и при наличии плеврита диагностируют Т-иммунологический подвариант неходжкинских лимфом.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом: больному с увеличенными периферическими лимфатическими узлами после биопсии гистологически устанавливают морфологический вариант неходжкинской лимфомы в соответствии с "Гистологической и цитологической классификацией опухолевых заболеваний кроветворной и лимфоидной ткани", принятой ВОЗ в 1976 году (Краевский Н. А. и Смольянников А.В. "Патолого-анатомическая диагностика опухолей человека).

Проводят рентгенографию органов грудной клетки, и при наличии теней увеличенных внутригрудных лимфатических узлов, одиночных или множественных теней в легких, усилении и деформации легочного рисунка, плеврита, диагностируют Т-иммунологический подвариант НХЛ.

Состояние органов грудной клетки изучалось рентгенографическим методом с использованием современных и доступных методов исследования: рентгенография в двух стандартных проекциях (прямая и боковая), а при необходимости томографии.

Это позволило выявить поражение лимфатических узлов средостения, которое проявляется в расширении срединной тени и определяется при таких заболеваниях, как злокачественные лимфомы, бронхогенный рак, но имеет ряд отличительных рентгенологических признаков (Л.С.Розенштраух и др. Рентгенодиагностика заболеваний органов дыхания, с. 504).

Легочные изменения характеризуются инфильтративным или (и) очаговым поражением легочной ткани.

Инфильтративная форма поражения легких развивается в результате распространения опухоли из смежных тканей (бронхо-пульмональных лимфатических узлов, л/у средостения).

К очаговой форме отнесены изменения в виде гомогенных очаговых или узловых уплотнений от единичных до множественных, с четкими очертаниями встречающиеся при острых очаговых пневмониях, туберкулезе, пневмокониозах, при венозном застое в легких, коллагенозах, метастазах злокачественных опухолей (Л.Д.Линденбратен, Л.Б.Наумов. Медицинская рентгенология. 1974, с. 191-198).

Поражение плевры может проявляться наличием жидкости в плевральной полости и (или) узловыми формами поражения париетальной плевры (Р.И.Макарычева. Поражение легких и плевры у больных лимфогранулематозоми гематосаркомами. Автореферат дис. Д.М.Н., 1983., с. 24-30).

Все перечисленные признаки поражения органов грудной клетки могут определяться при различных заболеваниях, но в различных сочетаниях.

Выявление же сочетания поражения периферических л/у, л/у средостения, интерстициально-очаговых изменений легочного рисунка, экссудативного плеврита и (или) узлового поражения плевры у больных НХЛ может свидетельствовать о Т-иммунологическом подварианте.

Предлагаемый способ прошел клинические испытания на базе кафедры рентгенорадиологии с курсом онкологии ГМИ у 75 больных, из них выявлено 12 человек с сочетанным поражением внутригрудных лимфатических узлов, легких и плевры, из этих 12 больных Т-иммунологический подвариант диагностирован у 5 больных.

Положительный эффект предлагаемого способа заключается в следующем.

1. Способ позволяет диагностировать Т-подвариант НХЛ доступным методом - при помощи рентгенографии. При выявлении у больного увеличения периферических лимфатических узлов его дообследуют рентгенологически и если выявляют расширение средостения, интерстициально-очаговое поражение легких, плеврит, то устанавливают Т-иммунологический подвариант НХЛ.

2. Осуществление предлагаемого способа не занимает более 30 мин.

3. Способ очень прост в исполнении, дешевле по сравнению с известным способом диагностики Т-иммунологического подварианта, т.к. не требует дорогостоящих, в том числе импортных, препаратов и специально оснащенной лаборатории.

Примеры конкретного исполнения даны в виде выписок из историй болезни.

П р и м е р 1. Больной М., 69 лет, история болезни N 82/11738.

Болен с июля 1982 года, когда обнаружил увеличение всех групп периферических лимфатических узлов.

Гистологически 13.04.83 г. установлен диагноз: пролимфоцитарная лимфосаркома периферических л/у.

Рентгенологически 8.04.83 г. выявлено расширение тени средостения, увеличение бронхо-пульмональных л/у, справа экссудативный плеврит и узловое уплотнение париетальной плевры. В правом легком инфильтративная тень в нижней доле и множественные мелко очаговые тени от 0,5-0,9 см в диаметре по всем легочным полям, но больше справа.

Заключение: злокачественная лимфома-Т-подвариант НХЛ.

П р и м е р 2. Больной И., 26 лет, история болезни N 86/3525.

Болен с февраля 1986 года, когда появилась давящая боль за грудиной, повысилась температура. По месту жительства рентгенологически выявлено расширение средостения и с диагнозом злокачественная лимфома? направлен на дообследование.

27.03.86 г. рентгенологически определяется расширение средостения до 12 см за счет увеличения лимфатических узлов больше влево с инфильтрацией легочной ткани в прикорневых зонах, наличием мелкоочаговых теней до 0,5 см в диаметре и экссудативным плевритом.

Заключение: неходжкинская лимфома, Т-иммунологический подвариант.

10.04.86 г. цитологически подтвержден диагноз злокачественной лимфомы.

14.04.86 г. иммунологическое обследование установило Т-иммунологический подвариант.

П р и м е р 3. Больная Р., 34 года, история болезни N 82/180.

Обратилась с жалобами на пальпируемый узел в левой молочной железе, появившийся около 3 месяцев назад, похудание, сухой кашель, боли в груди.

Об-но: в левой молочной железе пальпируется узел 4,5х3,0 см., увеличение подмышечных и надключичных лимфатических узлов слева.

Гистология N 5365 - гематосаркома.

Рентгенологически 29.01.82 г. выявлено расширение средостения больше влево (8 см) с инфильтрацией легочной ткани слева и множественными очаговыми тенями справа, слева экссудативный плеврит.

Заключение: рентгенологическая картина соответствует Т-иммунологическому подварианту неходжкинских лимфом.

16.02.82 г. иммунологически установлен Т-подвариант НХЛ. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



СПОСОБ РЕНТГЕНОДИАГНОСТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ЛИМФОМ путем рентгенографии органов грудной клетки, отличающийся тем, что, с целью повышения точности диагностики Т-иммунологического подварианта неходжкинских лимфом, определяют на рентгенограммах наличие одновременно теней увеличенных внутригрудных лимфатических узлов, одиночных или множественных очаговых теней в легких, усиление и деформацию легочного рисунка и при их наличии диагностируют Т-иммунологический подвариант находжкинских лимфом.