СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ

СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ


RU (11) 2271209 (13) C1

(51) МПК
A61K 31/675 (2006.01)
A61K 33/38 (2006.01)
A61P 35/00 (2006.01) 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 10.08.2007 - может прекратить свое действие 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(14) Дата публикации: 2006.03.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 2004124617/14 
(22) Дата подачи заявки: 2004.08.12 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2004.08.12 
(45) Опубликовано: 2006.03.10 
(56) Аналоги изобретения: Серебро в медицине, биологии и технике: Сб. Новосибирск, 1996, вып.5, с.40-43, 110-111. US 6569159, 27.05.2003. RU 2053773 C1, 10.02.1996. RU 2149633 C1, 27.05.2000. Кульский Л.А. Серебряная вода. Киев: Наукова Думка, 1987, с.48-48, 57-58, 67-68, 75-80, 134-135. 
(72) Имя изобретателя: Авакимян Сергей Борисович (RU); Бахмутский Николай Георгиевич (RU); Щимаева Ирина Виленовна (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Авакимян Сергей Борисович (RU) 
(98) Адрес для переписки: 350063, г.Краснодар, ул. Седина, 4, КГМА, зав. патентным отделом, Т.А. Дорониной 

(54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ
Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть использовано при лечении злокачественных опухолей различного генеза. Для этого больному одно- или двукратно ежедневно внутривенно вводят электролизный раствор серебра в дозе 0,05-0,1 мг/кг веса тела по серебру, курсом 1-3 месяца, или такое введение электролизного раствора серебра чередуют через день с циклофосфаном в принятых дозировках. Использование электролизного раствора серебра в данной концентрации обеспечивает выраженное снижение скорости роста опухоли и усиление апоптоза опухолевых клеток, в том числе увеличение эффективности циклофосфана, без проявления общетоксического действия. 3 табл.




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Предлагаемое изобретение относится к медицине, ветеринарии и может быть использовано в хирургии и в сельском хозяйстве при лечении, например, опухолей разного генеза.

Актуальность вопроса обусловлена тем, что механизм действия многих из существующих в настоящее время противоопухолевых препаратов связан с торможением синтеза ДНК. Это свойство относится, в первую очередь, к опухоли, но распространяется и на нормальную ткань. К тому же многие из этих препаратов наряду с противоопухолевой активностью обладают выраженным токсическим действием и, как правило, отрицательно влияют на кроветворение, гранулоцитопоэз, нередко вызывают поражение желудочно-кишечного тракта, лимфоидных органов, печени, почек, щитовидной железы, угнетают иммунитет.

В связи с изложенным выявление и разработка препаратов, обладающих противоопухолевым действием и одновременно не обладающих выраженным общетоксическим действием, представляется вполне оправданным.

Известен способ лечения злокачественных опухолей с применением циклофосфана. При этом циклофосфан растворяют в дистиллированной воде и вводят ежедневно внутривенно, внутримышечно или применяют внутрь в дозе 4 мг/кг веса [1, 2].

За прототип принят способ подавления опухолевого роста путем внутривенного или внутрибрюшинного введения фторурацила в дозе 15 мг/кг веса [1, 2] - одного из наиболее широко распространенных противоопухолевых препаратов, который предварительно растворяют в дистиллированной воде. Однако данный препарат имеет очень малый разрыв между терапевтической и токсической дозами и, к тому же, обладает выраженными побочными эффектами: вызывает лейкопению, цитопению, угнетает функцию печени, обладает кардиотоксическим действием, угнетает кроветворение и иммунитет. Введение препарата сопровождается развитием стоматита, эзофагита и проктита, диареи, появлением тошноты и рвоты.

Задачами изобретения являются: предложение препарата, подавляющего рост опухоли, обладающего меньшей, нежели наиболее распространенные противоопухолевые препараты токсичностью, обеспечивающего уменьшение тяжести течения заболеваний, связанных с побочным действием, и улучшение результатов лечения опухолевых процессов разного генеза.

Сущность изобретения заключается в подавлении опухолевого роста путем ежедневного однократного или двукратного внутривенного или внутрибрюшинного введения электролизного раствора серебра [3] в дозах 0,05-0,1 мг/кг веса. Воздействие осуществляют как при самостоятельном введении электролизного раствора серебра, так и в сочетании с циклофосфаном или другими противоопухолевыми препаратами. Продолжительность курса лечения составляет 1-3 месяца, что определяется клинической картиной заболевания. Учитывая безвредность данного препарата, вводимого в данных дозировках, по показаниям курс лечения может быть продолжен.

Способ осуществляют следующим образом.

При выявлении опухоли электролизный раствор серебра в суточной дозе 0,05-0,1 мг/кг веса назначают внутривенно один-два раза в сутки самостоятельно или на фоне применения других противоопухолевых препаратов. При внутривенном или внутрибрюшинном введении электролизный раствор серебра вводят, разбавляя его предварительно раствором сахарозы (последнюю применяют в дозе, обеспечивающей изотоничность вводимого раствора). Указанные дозировки электролизного серебра были выбраны в связи с данными наших исследований по влиянию различных доз электролизных растворов серебра (0,025, 0,05, 0,1 и 0,2 мг/кг веса) на фагоцитарную функцию нейтрофильных лейкоцитов. При этом было установлено, что все указанные дозы стимулировали фагоцитарную активность нейтрофилов, но наибольший эффект оказывала доза 0,05 мг/кг веса.

Для доказательства достоверности подавления опухолевого роста использовали опухоли, перевиваемые подкожно крысам (саркома 45 и лимфосаркома), и опухоль молочной железы человека. При этом в случае с перевивными опухолями основным показателем для определения противоопухолевого эффекта служила продолжительность жизни животных, являющаяся одним из основных критериев эффективности противоопухолевых препаратов [4].

Определение противоопухолевой активности осуществлялось двумя способами. При этом препараты вводились внутрибрюшинно. Данный метод введения препарата выбран в связи с тем, что он считается адекватным внутривенному введению.

Первый способ осуществляли следующим образом.

1. Крысам подкожно в левую паховую область введено 0,5 мл взвеси опухолевых клеток (1/3) саркомы RS-45. Спустя 7 суток после перевивания опухоли, животных распределили в четыре группы: 1) группа контроля, лечение которой осуществляли путем введения в брюшную полость физиологического раствора; 2) 1-ая опытная группа, лечение животных в которой производили циклофосфаном, вводимым внутрибрюшинно в дозе 4 мг/кг веса; 3) 2-ая опытная группа: лечение осуществляли путем внутрибрюшинного введения электролизного раствора серебра в дозе 0,05 мг/кг веса. 

Определение влияния электролизного серебра на течение опухолевого процесса осуществляли путем подсчета продолжительности жизни животных в разных группах. Введение препаратов проводили на протяжении всего периода жизни животных, и в отдельных случаях оно продолжалось до 80 суток. Результаты этих подсчетов представлены в таблице 1.

Таблица 1

Продолжительность жизни крыс с перевивной опухолью саркома-45 на фоне применения электролизных растворов серебра 
Группы Количество животных в группе Средняя продолжитель-ность жизни Ошибка Сигма 
Контроль 8 50,00 ±3,381 8,944 
Циклофосфан 7 62,42 ±5,665 14,987 
Электролизный р-р серебра 7 68,42 ±4,477 11,844 

Достоверность различий 
Сравниваемые группы Т Р 
Контроль-циклофосфан 1,884 Р>0,05 
Контроль-электр. серебро 3,285 Р<0,01 
Циклофосфан

/элекролизный раствор серебра 0,831 Р>0,05 


Полученные данные свидетельствуют о том, что при лечении саркомы-45 электролизными растворами серебра продолжительность жизни животных достоверно увеличивается в сравнении с контролем (68,42 против 50 в контроле) на 36,84%. В то же время при использовании циклофосфана - на 24%.

Таким образом, при внутрибрюшинном введении циклофосфана и электролизного раствора серебра крысам с перевивной опухолью саркома-45 наибольшая продолжительность жизни отмечена у животных, получавших электролизный раствор серебра. Меньшая продолжительность жизни отмечена в группе животных, получавших циклофосфан. Различия в продолжительности жизни животных в группе контроля и группой, получавшей электролизный раствор серебра, достоверны. При лечении животных циклофосфаном в дозе 4 мг/кг веса животного средняя продолжительность жизни крыс в данной группе также превышает продолжительность жизни крыс в группе контроля, но данные не достоверны. Также не достоверны данные при сравнении продолжительности жизни в группах животных, получавших циклофосфан и электролизный раствор серебра.

В следующем исследовании изучали противоопухолевую активность разных концентраций электролизных растворов серебра. Для этого мышам С-57 BL была перевита опухоль - лимфолейкоз. Лечение начато на следующие сутки. Животным контрольной группы (11) внутрибрюшинно вводили 0,5 мл физиологического раствора. В следующей группе (10 животных) производили введение электролизного раствора серебра в дозе 0,05 мг/кг веса. Объем вводимого раствора такой же. В третьей группе (8 мышей) электролизный раствор серебра вводили в дозе 0,1 мг кг/веса.

Данные о средней продолжительности жизни представлены в таблице 2.

Таблица 2

Продолжительность жизни мышей с перевивной опухолью лимфосаркомы на фоне применения электролизных растворов серебра 
Группы Количество животных в группе Средняя продолжительность жизни Ошибка Сигма 
Контроль 11 6,00 ±1,164 3,493 
Ag+ 0,05 мг/кг 10 9,82 ±0,696 2,088 
Ag+ 0,1 мг/кг 8 9,63 ±0,754 1,996 

Достоверность различий 
Т Р 
Контроль-Ag+ 0,05 мг/кг 2,801 Р<0,05 
Контроль-Ag+ 0,10 мг/кг 2,613 Р<0,05 
Ag+ 0,05 мг/кг - Ag+ 0,10 мг/кг 0,831 Р>0,05 


Полученные данные свидетельствуют о том, что при лечении лимфолейкоза электролизными растворами серебра продолжительность жизни животных достоверно увеличивается в сравнении с контролем. В приведенных исследованиях апробированы следующие дозировки электролизных растворов серебра: 0,05 мг и 0,1 мг/кг веса. При этом в случае использования раствора серебра в дозе 0,05 мг/кг веса продолжительность жизни достоверно увеличивается (9,82 против 6,0 в контроле) на 63%, а в случае применения серебра в дозе 0,1 мг/кг (9,63 против 6,0 в контроле) на 60%. Различия же между двумя опытными группами не достоверны. Т.е. в данном случае мы имеем примерно одинаковую противоопухолевую активность двух дозировок электролизного раствора серебра.

Наконец, следующим методом, используемым нами для выявления противоопухолевой активности электролизных растворов серебра, был метод культивирования опухолевой ткани в диффузионных камерах. В данном случае в качестве культуры использовали опухоль молочной железы.

Образцы опухолевой ткани получили во время операции. Из операционной кусочки опухолевой ткани в охлажденном растворе среды 199 доставляли в лабораторию, где согласно методическим рекомендациям АН СССР [5] осуществляли трансплантацию опухоли в диффузионные камеры.

Двадцати крысам в брюшную полость произведена трансплантация диффузионных камер с опухолью молочной железы (каждой из крыс по 2-3 камеры). После этого сформировали 4 группы животных, по 5 животных в каждой группе. 1-ая группа - контроль, животным этой группы лечения не проводилось. В трех опытных группах введение препаратов было начато через 48 часов после трансплантации опухоли и продолжалось в течение 8 дней. Во 2-ой группе животным лечение проводили внутрибрюшинным введением электролизного раствора серебра на сахарозе в дозе 0,05 мг серебра на кг веса. Крысы 3-ей группы также внутрибрюшинно получали раствор циклофосфана из расчета 4 мг/кг. Животным 4-ой группы введение электролизного раствора серебра (0,05 мг/кг) чередовали с введением циклофосфана (4 мг/кг), т.е. препарат одного вида вводили через день. Через 8 суток животные усыплены эфиром и выведены из опыта. Миллипоровые камеры извлечены, фильтры с опухолевыми клетками отделены от камер, препараты окрашены и заключены в бальзам. При исследовании препаратов выявлено, что в случаях применения электролизных растворов серебра зона роста опухоли часто отсутствует, имеется выраженная дистрофия опухолевых клеток, в опухолевой ткани присутствуют фагоцитирующие макрофаги большого размера. При применении циклофосфана наблюдается выраженная дистрофия опухолевых клеток, распад клеток. При чередовании введения циклофосфана и электролизного раствора серебра в препаратах наряду с дистрофией опухолевых клеток наблюдается выраженная фибробластная селекция с волокнообразованием. В препаратах всех серий исследовали рост опухолевых клеток, митотическую активность их и апоптоз, при этом последний более выражен при совместном применении препаратов. Результаты исследований представлены в таблице 3.

Таблица 3

Изменения митотического индекса и индекса апоптоза под влиянием электролизного раствора серебра и циклофосфана 
Группы Митотический индекс (в промиллях) Индекс апоптоза (в промиллях) 
Контроль 5,8 3,0 
Электролизный р-р серебра 3,5 9,7 
Циклофосфан 1,7 10,7 
Чередование электролизного раствора серебра и циклофосфана 2,7 17,0 


Таким образом, электролизные растворы серебра при применении их для лечения перевивных опухолей как самостоятельно, так и в комбинации с циклофосфаном, вызывают значительное повышение продолжительности жизни животных, что обусловлено снижением митотической активности опухолевых клеток и возрастанием их апоптоза.

Техническим результатом в способе является то, что использование электролизных растворов серебра, которые в отличие от большинства противоопухолевых препаратов не обладают выраженным общетоксическим действием, позволяет получить достаточно высокий противоопухолевый эффект.

Изобретательским уровнем в заявке можно считать обнаружение неописанной прежде способности электролизных растворов серебра в концентрации 0,05-0,1 мг/кг веса в значительной степени подавлять рост опухолей и, в связи с этим, применять данные растворы как самостоятельно, так и в комплексе с другими препаратами для лечения опухолей.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет достаточно эффективно воздействовать на опухоли, приводя, с одной стороны, к заметному снижению скорости их роста, а с другой - к апоптозу опухолевых клеток.

ЛИТЕРАТУРА

1. Клиническая химиотерапия опухолевых заболеваний. М., 1976.

2. ВИДАЛЬ СПЕЦИАЛИСТ. Справочник "Онкология". М.: Астра Фарм Сервис, 2003, с.381.

3. Кульский Л.А. Серебряная вода. Киев: Наукова думка, 1987 г.

4. Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США. М.: Медицина, 1979. 

5. Применение метода диффузионных камер для культивирования опухолей человека и исследования их чувствительности к противоопухолевым препаратам. М., 1982.




ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ лечения злокачественных опухолей, включающий введение медикаментов, отличающийся тем, что больному одно- или двукратно ежедневно внутривенно вводят электролизный раствор серебра в дозе 0,05-0,1 мг/кг веса тела по серебру, курсом 1-3 месяца, или такое введение электролизного серебра чередуют через день с циклофосфаном в принятых дозировках.