СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ НИЗКОДИФФЕРЕНЦИРОВАННОЙ АДЕНОКАРЦИНОМЫ ЭНДОМЕТРИЯ

СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ НИЗКОДИФФЕРЕНЦИРОВАННОЙ АДЕНОКАРЦИНОМЫ ЭНДОМЕТРИЯ


RU (11) 2268472 (13) C1

(51) МПК
G01N 33/68 (2006.01) 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 10.08.2007 - может прекратить свое действие 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(14) Дата публикации: 2006.01.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 2004124083/15 
(22) Дата подачи заявки: 2004.08.06 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2004.08.06 
(45) Опубликовано: 2006.01.20 
(56) Аналоги изобретения: RU 2232397 С2, 10.07.2004. RU 2127429 C1, 10.03.1999. RU 2054183 C1, 10.02.1996. SU 1627138 А1, 15.02.1991. Клиническая оценка лабораторных тестов. Под ред. Н.У.Тица. - М.: Медицина, 1986, с.255. 
(72) Имя изобретателя: Пашов Александр Иванович (RU); Цхай Виталий Борисович (RU); Булыгин Геннадий Викторович (RU); Камзалакова Наталья Ивановна (RU); Дыхно Юрий Александрович (RU); Платонова Людмила Николаевна (RU) 
(73) Имя патентообладателя: ГОУ ВПО "Красноярская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения РФ" (RU) 
(98) Адрес для переписки: 660022, г.Красноярск, ул. П. Железняка, 1, Красноярская государственная медицинская академия, патентный отдел 

(54) СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ НИЗКОДИФФЕРЕНЦИРОВАННОЙ АДЕНОКАРЦИНОМЫ ЭНДОМЕТРИЯ
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в гинекологии и онкологии. У больной определяют активность фермента НАД-зависимой малатдегидрогеназы (НАДМДГ) в периферической крови и при величине показателя менее 52,68 мкЕ/мкл предполагают наличие низкодифференцированной аденокарциномы эндометрия. Способ позволяет без проведения гистероскопии и забора биопсийного материала или диагностического выскабливания полости матки установить наличие в эндометрии низкодифференцированной опухолевой ткани. 1 табл. 




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к медицине и может быть использовано в гинекологии и онкологии.

Актуальность разработки способа ранней диагностики низкодифференцированной аденокарциномы эндометрия обусловлена тем, что эта патология предусматривает тактику лечения (в том числе и объем оперативного вмешательства), отличающуюся от тактики при высоко- или умереннодифференцированных опухолях. В ряде же случаев низкодифференцированная ткань может возникать и на фоне имеющегося опухолевого процесса, при котором морфологически ткань опухоли характеризуется как высоко- или умереннодифференцированная. Возможность использования уже при догоспитальном обследовании больных малоинвазивного по сравнению с гистероскопией, имеющей ряд противопоказаний и ограничений [7], способа диагностики развития в эндометрии низкодифференцированной ткани позволит повысить эффективность результатов лечения пациенток с этими заболеваниями. 

Известен способ ранней диагностики доброкачественных гиперпластических процессов эндометрия, для реализации которого используются показатели оксидантного и антиоксидантного статуса, в частности, соотношения глутатионпериксидаза/диеновые конъюгаты и глутатионпериксидаза/восстановленный глутатион, являющиеся диагностическим критерием наличия железисто-фиброзных полипов, железистых полипов и железисто-кистозной гиперплазии эндометрия [2].

Источников по ранней диагностике низкодифференцированной аденокарциномы эндометрия в доступной литературе нами не обнаружено. 

Задачей изобретения является ранняя диагностика развития низкодифференцированной аденокарциномы эндометрия.

Задачу решают за счет того, что определяют активность фермента НАД-зависимой малатдегидрогеназы в периферической крови больной и при снижении активности менее 52,68 мкЕ в 1 микролитре крови предполагают наличие низкодифференцированной аденокарциномы эндометрия.

Выбор в качестве диагностического критерия показателя активности фермента НАД-зависимой малатдегидрогеназы (НАДМДГ) обусловлен результатами определения активности НАД- и НАДФ-зависимых ферментов цикла трикарбоновых кислот (ЦТК) в тканях высоко-, умеренно- и низкодифференцированной аденокарциномы эндометрия и в периферической крови больных.

Во-первых, при наличии у больных как высоко- и умереннодифференцированной ("первый патогенетический вариант заболевания"), так и низкодифференцированной аденокарциномы эндометрия ("второй патогенетический вариант") [1] активность ряда ферментов ЦТК в тканях опухолей отличается от их уровней, определяемых в нормальной ткани эндометрия. Так, при первом патогенетическом варианте показатели НАДИЦДГ и НАДФИЦДГ (НАД- и НАДФ-зависимые изоцитратдегидрогеназы) и НАДМДГ равны, соответственно, 84,45±4,50 мкЕ, 42,53±2,15 мкЕ и 149,13±11,5 мкЕ в 1 микрограмме ткани (мкЕ/мкг), что достоверно ниже аналогичных показателей контроля (133,60±15,47 мкЕ/мкг, Р0.01; 61,10±6,11 мкЕ/мкг, Р<0,01; 216,94±15,90 мкЕ/мкг; Р<0,01). Показатель же НАДФМДГ достоверно более высок в опухолевой ткани (7,14±0,48 мкЕ/мкг, в контроле 4,47±0,33 мкЕ/мкг; Р<0,001). Уровни этих ферментов при низкодифференцированной аденокарциноме эндометрия подобным образом соотносятся с уровнем контроля, но их изменения еще более выражены: активность НАДИЦДГ составляет 38,40±3,28 мкЕ/мкг (Р<0,001), НАДФИЦДГ - 20,41±2,42 мкЕ/мкг (Р<0,001), НАДМДГ - 34,20±3,08 мкЕ/мкг (Р<0,001), НАДФМДГ - 22,10±2,72 мкЕ/мкг (Р<0,001). Установленные особенности внутриклеточных реакций опухолевой ткани отражают наиболее общие метаболические механизмы патологических процессов: снижение активности НАД-зависимых ферментов ЦТК, обеспечивающих основные потребности клеток в АТФ, с одновременной выраженной активацией НАДФ-зависимых ферментов. Этот механизм обусловливает повышение уровня пластических реакций метаболизма и способность клеток к пролиферации, что проявляется при многих заболеваниях [3, 4, 8].

Во-вторых, при определении активности этих ферментов в периферической крови установлены соотношения показателей, аналогичные зарегистрированным в ткани эндометрия, причем различия между группами больных и здоровых также достоверны. При высоко- и умереннодифференцированных опухолях активность НАДИЦДГ определяется равной 8,41±0,66 мкЕ/мкл, НАДФИЦДГ - 3,48±0,27 мкЕ/мкл, НАДМДГ - 159,74±17,8 мкЕ/мкл, НАДФМДГ - 4.89±0,39 мкЕ/мкл (в контрольной группе, соответственно: 24,79±3,20 мкЕ/мкл, Р<0,001; 16,36±1,86 мкЕ/мкл, Р<0,001; 238,95±33,5 мкЕ/мкл, Р<0,05; 3,36±0,39 мкЕ/мкл, Р<0,01). При низкодифференцированной аденокарциноме эндометрия показатель НАДИЦДГ равен 3,10±0,32 мкЕ/мкл, НАДФИЦДГ - 2,01±0,19 мкЕ/мкл, НАДМДГ - 36,03±4,46 мкЕ/мкл; НАДФМДГ - 17,95±1,60 мкЕ/мкл (Р<0,001 - достоверность различий с контролем для всех ферментов). Этим подтверждается известная из литературы способность показателей активности метаболических ферментов периферической крови отражать не только нейрогуморальную регуляцию обменных процессов организма, но и особенности метаболических реакций в очаге патологических процессов [5].

В-третьих, методом корреляционного анализа подтверждается тесная взаимозависимость уровней активности ферментов, определяемых в ткани опухолей эндометрия и периферической крови больных женщин. При этом все коэффициенты корреляции между соответствующими парами ферментов положительны и достоверны с уровнем не менее 99 процентов: НАДИЦДГ "ткань-кровь" - 0,56; НАДФИЦДГ "ткань-кровь" - 0,37; НАДМДГ "ткань-кровь" - 0,53; НАДФМДГ "ткань-кровь" - 0,78 (критическое значение коэффициента корреляции для Р<0,01-0,35).

Диагностическим критерием, позволяющим установить наличие у пациентки низкодифференцированной аденокарциномы эндометрия, избран показатель активности фермента НАДМДГ в периферической крови больных высоко- и умереннодифференцированной аденокарциномой эндометрия, так как при статистическом анализе для него установлено максимальное расхождение вариационных рядов в группах больных с первым и вторым патогенетическими вариантами заболевания.

Предлагаемый способ реализуют следующим образом: 

активность НАДМДГ определяют методом биолюминесценции с бактериальной люциферазой [6] в 20 мкл периферической крови из пальца обследуемой. При условии снижения у больной активности фермента НАДМДГ ниже 52,68 мкЕ/мкл делают заключение о наличии низкодифференцированной аденокарциномы эндометрия. Указанное "критическое" значение показателя получено из среднего значения параметра группы больных высоко- и умереннодифференцированной аденокарциномой эндометрия, равного 159,74±17,84 мкЕ/мкл, за вычетом его сигмального отклонения для выборки: 159,74-107,06=52,68 мкЕ/мкл.

Пример. Пациентка Б., 52 лет (карта обследования №45) поступила в отделение гинекологии Краевого онкологического диспансера с жалобами на кровянистые выделения из половых путей в течение 2-х недель, слабость, головокружение. В анамнезе 5 беременностей, 2 срочных родов, 3 медицинских аборта, внутриматочная спираль - в течение 7 лет, удалена в возрасте 46 лет. Менопауза в течение 2-х лет, на приеме у гинеколога не была в течение 5-ти лет. При осмотре матка увеличена до размеров 5-6 недель беременности, мягковатой консистенции, безболезненная, подвижная. Придатки матки не пальпируются, своды свободные. Выделения из половых путей кровянистые, в умеренном количестве.

По техническим причинам гистероскопия с биопсией эндометрия не проводилась. В отделении было произведено диагностическое выскабливание полости матки; гистологическое заключение №1336-42: в эндометрии определялось наличие высокодифференцированной аденокарциномы.

При клинико-лабораторном обследовании наряду с общепринятыми анализами произведено определение активности фермента НАДМДГ в периферической крови. Результат - активность фермента равна 38,49 мкЕ/мкл, что предполагало наличие у больной низкодифференцированной аденокарциномы эндометрия.

Оперативное лечение произведено на основании предварительного гистологического заключения - по результатам диагностического выскабливания - в объеме лапаротомии, пангистероэктомии без лимфаденэктомии. Результат окончательного гистологического исследования №1412-31: в эндометрии определялась низкодифференцированная аденокарцинома с инвазией в миометрий до серозной оболочки; придатки матки с возрастными инволютивными изменениями.

В связи с тем, что оперативное лечение было произведено в объеме, не соответствующем стадии и морфологическому варианту опухоли, в дальнейшем больной был назначен курс послеоперационной лучевой терапии с повышенной суммарной дозой - 60 Гр (против 45 Гр, назначаемых при адекватном объеме оперативного лечения) [1].

В таблице представлены результаты обследования 36 женщин, у которых морфологически подтверждено наличие высоко- или умереннодифференцированной аденокарциномы эндометрия (В ДА), и 17 больных с низкодифференцированными опухолями (НДА), использованные для разработки предлагаемого способа. Как определяется из представленных данных, предполагаемый диагноз, устанавливаемый по показателю активности НАДМДГ, не получил своего подтверждения при гистологическим исследовании только в 7 случаях, причем в 4-х из них (карты обследованных №№3, 8, 13, 21) это было связано с "гипердиагностикой".

Преимущества данного способа заключаются в том, что он позволяет при использовании 20 мкл крови из пальца без проведения гистероскопии и забора биопсийного материала или диагностического выскабливания полости матки установить наличие в эндометрии низкодифференцированной опухолевой ткани.

Таблица 
Достоверность оценки морфологического варианта опухоли эндометрия по активности НАДМДГ 
№ карты больной Активность НАДМДГ Морфологический вариант опухоли Совпадение диагнозов 
Предполагаемый установленный 
20. 21,56 НДА НДА ДА 
49. 21,72 НДА НДА ДА 
32. 25,98 НДА НДА ДА 
5. 26,77 НДА НДА ДА 
10. 27,92 НДА НДА ДА 
33. 28,89 НДА НДА ДА 
44. 30,59 НДА НДА ДА 
41. 32,78 НДА НДА ДА 
54. 33,18 НДА НДА ДА 
45. 38,49 НДА НДА ДА 
19. 38,76 НДА НДА ДА 
13. 41,88 НДА ВДА НЕТ 
8. 42,44 НДА ВДА НЕТ 
42. 42,84 НДА НДА ДА 
51. 44,37 НДА НДА ДА 
21. 47,88 НДА ВДА НЕТ 
53. 47,96 НДА НДА ДА 
3. 48,32 НДА ВДА НЕТ 
4. 52,87 ВДА НДА НЕТ 
11. 53,07 ВДА НДА НЕТ 
26. 56,47 ВДА НДА НЕТ 
25. 61,13 ВДА ВДА ДА 
12. 61,23 ВДА ВДА ДА 
29. 63,82 ВДА ВДА ДА 
27. 65,24 ВДА ВДА ДА 
6. 73,87 ВДА ВДА ДА 
47. 82,44 ВДА ВДА ДА 
30. 87,62 ВДА ВДА ДА 
34. 96,98 ВДА ВДА ДА 
55. 98,34 ВДА ВДА ДА 
39. 108,74 ВДА ВДА ДА 
2. 112,54 ВДА ВДА ДА 
43. 116,26 ВДА ВДА ДА 
18. 135,89 ВДА ВДА ДА 
22. 140,23 ВДА ВДА ДА 
14. 144,43 ВДА ВДА ДА 
35. 153,26 ВДА ВДА ДА 
50. 159,32 ВДА ВДА ДА 
56. 161,73 ВДА ВДА ДА 
9. 163,47 ВДА ВДА ДА 
28. 183,62 ВДА ВДА ДА 
52. 184,18 ВДА ВДА ДА 
1. 184,37 ВДА ВДА ДА 
7. 187,01 ВДА ВДА ДА 
16. 187,11 ВДА ВДА ДА 
48. 193,52 ВДА ВДА ДА 
46. 207,81 ВДА ВДА ДА 
31. 247,57 ВДА ВДА ДА 
40. 295,38 ВДА ВДА ДА 
15. 322,11 ВДА ВДА ДА 
24. 350,31 ВДА ВДА ДА 
17. 468,27 ВДА ВДА ДА 
23. 472,14 ВДА ВДА ДА 
Совпадение предполагаемого и установленного морфологических вариантов опухоли 86,79% 
Примечание: ВДА - высоко- и умереннодифференцированная аденокарцинома эндометрия; 

НДА - низкодифференцированная аденокарцинома эндометрия. 


Источники информации

1. Бохман Я.В. Руководство по онкогинекологии. - СПб.: "ООО Издательство Фолиант", 2002. - 542 с.

2. Брехова И.С. Волков НА., Титова Н.М. Полстяная Г.Н. "Способ ранней диагностики доброкачественных гиперпластических процессов эндометрия". Патент РФ №2120221 от 27.09.2002 г.

3. Булыгин Г.В., Камзалакова Н.И., Андрейчиков А.В. Метаболические основы регуляции иммунного ответа. - Новосибирск: Издательство СО РАМН, 1999. - 346 с.

4. Булыгин Г.В., Якимов С.В. Метаболический иммунодефицит у больных острым панкреатитом и методы его коррекции / И.П. Назаров, Ю.С.Винник, С.С.Дунаевская // Иммунопатология в хирургии и анестезиологии. - Красноярск, 2003. - Ч.3. - С.96-179.

5. Колб В.Г., Зубовская Е.Т. Интерпретация некоторых энзимологических показателей при заболеваниях внутренних органов // Здравоохранение Белоруссии. - 1986. - №9. - С.62-66. 

6. Савченко А.А. Высокочувстительное определение активности дегидрогеназ в лимфоцитах периферической крови человека биолюминесцентным методом / А.А. Савченко, Л.Н. Сунцова // Лаб. дело. - 1989. - №11. - С.23-25.

7. Стрижаков А.Н., Давыдов А.И. Гистерорезектоскопия. - М.: Медицина, 1997. - 180 с.

8. Тихонова Е.П., Булыгин Г.В. Метаболические основы иммунореактивности при парентеральных гепатитах В и С. - Новосибирск: Наука, 2003. - 146 с.




ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ ранней диагностики низкодифференцированной аденокарциномы эндометрия, заключающийся в определении активности фермента НАД-зависимой малатдегидрогеназы в периферической крови больной и при снижении активности НАД-зависимой малатдегидрогеназы менее 52,68 мкЕ/мкл предполагают наличие низкодифференцированной аденокарциномы эндометрия.