ИЗОБРЕТЕНИЕ
Патент Российской Федерации RU2283105

АНАЛОГИ ЖИРНЫХ КИСЛОТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА

Имя заявителя:  
Имя изобретателя:   БЕРГЕ Рольф (NO)
Имя патентообладателя: Тиа Медика АС (NO)
Адрес для переписки: 191036, Санкт-Петербург, а/я 24, "НЕВИНПАТ", пат.пов. А.В.Поликарпову
Дата начала действия патента:  2001.07.13 

Предложено применение аналогов жирных кислот или их солей или комплекса для приготовления фармацевтической композиции для предупреждения первичных и вторичных метастатических неоплазм и ингибирования вторичных метастатических неоплазм и соответствующий способ лечения или ингибирования вторичных метастатических неоплазм. В частности, аналоги представляют собой тетрадецилтиоуксусную кислоту или тетрадецилселеноуксусную кислоту. Показана способность тетрадецилтиоуксусной кислоты значительно подавлять миграционную способность клеток на модельной системе злокачественных опухолей.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к аналогам жирных кислот, которые можно применять для лечения и/или предупреждения рака. Более конкретно, изобретение относится к применению аналогов жирных кислот для лечения и/или подавления первичных или вторичных неоплазм.

Предшествующий уровень техники.

Лечение модифицированными жирными кислотами по настоящему изобретению представляет новый способ лечения этих заболеваний.

В ЕР 345038 описано применение -неокисляемых аналогов жирных кислот для лечения состояний гиперлипидемии и для снижения концентрации холестерина и триглицеридов в крови млекопитающих.

В PCT/NO95/00195 описаны алкил-S-CH 2COOR и алкил-Se-CH2СООК для ингибирования окислительной модификации ЛНП (липопротеина низкой плотности) и для подавления пролиферации раковых клеток. Однако такой пролиферативный эффект является клеточно-специфичным, и авторы изобретения показали, что соединения по настоящему изобретению в других клеточных системах не оказывают влияния на рост или пролиферацию клеток.

В PCT/NO99/00135, 00136 и 00149 описано применение аналогов жирных кислот для лечения ожирения, диабета и стеноза.

Теперь установлено, что аналоги, описанные в упомянутых выше публикациях предшествующего уровня техники, то есть -неокисляемые жирные кислоты по настоящему изобретению, имеют более широкую область применений. Авторы изобретения показали, что соединения по настоящему изобретению подавляют рост и метастатическое развитие опухолей и повышают общее выживание животных с имплантированными опухолями.

РАК

Разработка новых и более эффективных химиотерапевтических агентов для лечения рака требует рассмотрения множества факторов, включая цитотоксичность, пролиферацию клеток опухоли, инвазию и метастазирование. Традиционные противораковые агенты обычно определяли только на основании их цитотоксичности.

Полагают, что прогрессирование опухоли происходит, когда отличающиеся клетки, обладающие селективными свойствами роста, возникают в популяции опухолевых клеток, и одной из конечных стадий прогрессирования опухоли является появление метастатического фенотипа. При метастазировании опухолевые клетки проникают в кровеносные сосуды, сохраняются несмотря на циркулирующие агенты иммунной защиты хозяина, а затем выходят из сосудов и внедряются и развиваются в местах, удаленных от первичной опухоли. Эта способность клеток опухоли проникать в соседние ткани и колонизировать другие органы является одной из главных причин связанных с раком смертей.

Термин "метастазирование" охватывает ряд фенотипических особенностей, в совокупности приводящих к клинической проблеме, которая наиболее часто ведет к смерти от рака. Клетки теряют свое сцепление и ограниченное положение в живой ткани, передвигаются в прилегающие участки, развивают способность как проникать, так и выходить из кровеносных сосудов и становятся способны пролиферировать в неестественных местах или окружающих условиях. Эти изменения в формах развития сопровождаются аккумуляцией биохимических изменений, которые способны активизировать метастатический процесс.

До сих пор мало известно о внутреннем механизме, вовлеченном в метастатический каскад. Вероятно, что в некоторых случаях увеличенный метастатический потенциал определенных опухолевых клеток может быть обусловлен повышенной экспрессией онкогенов, которые в норме ответственны за контроль различных клеточных функций, включая дифференцировку, пролиферацию, подвижность и взаимодействие клеток. Кроме того, было показано, что вещества, которые модулируют пути передачи сигналов, могут подавлять метастатическое развитие опухоли, и также строятся гипотезы, что соединения с эффектами, связанными с поверхностями, например соединения, модулирующие клеточные мембраны, могут быть вовлечены в процесс, ведущий к метастазированию.

Рак представляет собой заболевание в виде неуместной аккумуляции ткани. Это нарушение клинически наиболее очевидно, когда масса опухолевой ткани ставит под угрозу функцию жизненно важных органов. Вопреки тому, что полагают обычно, злокачественные расстройства у человека в большинстве случаев не являются заболеваниями быстрой пролиферации клеток. В действительности клетки наиболее распространенных раковых опухолей пролиферируют медленнее, чем многие клетки в нормальных тканях. Именно относительно медленная аккумуляция опухолевой ткани в жизненно важных органах оказывается смертельной для большинства пациентов, которые умирают от рака.

Химиотерапевтические агенты обладают общим свойством: они обычно более эффективно уничтожают или повреждают злокачественные клетки, чем нормальные клетки. Однако тот факт, что они причиняют вред нормальным клеткам, указывает на их потенциальную токсичность.

Почти все Химиотерапевтические агенты, которые применяют в настоящее время, препятствуют синтезу ДНК, обеспечению предшественников для синтеза ДНК и РНК или митозу. Такие лекарственные средства наиболее эффективны против циклирующих клеток. Механизм смерти клетки после обработки одним агентом или сочетанием агентов является сложным и, вероятно, включает в себя более чем один процесс. Поскольку большинство клинически обнаруживаемых опухолей состоят главным образом из нециклирующих клеток, неудивительно, что химиотерапия не всегда эффективна в уничтожении рака.

Стратегия лечения рака состоит в изменении опухолевых клеток от нециклирующего компартмента до цитирующего компартмента. Некоторые способы, которые способствуют этому изменению, дают основу для лечения комбинированными средствами. Хирургическая операция наиболее часто применяется для уменьшения размера опухоли и, таким образом, способствует повторному вступлению раковых клеток в клеточный цикл. После того как первичную опухоль полностью удаляют, микроскопические метастазы могут остаться в удаленных местах. Из-за их небольшого размера микрометастазы состоят главным образом из циклирующих клеток. Небольшие количества клеток, которые остаются на месте первичной опухоли также, по-видимому, повторно вступают в клеточный цикл. Таким образом, остающиеся раковые клетки часто являются чувствительными к химиотерапии. Можно также применять только лучевую терапию или химиотерапию для того, чтобы уменьшить массу опухоли и, таким образом, вовлечь клетки в циклирующий клеточный компартмент.

Таким образом, комбинированная лекарственная терапия является основой для большинства видов химиотерапии, применяемых в настоящее время. Комбинированная химиотерапия использует разные механизмы действия и цитотоксические потенциалы многокомпонентных лекарств.

Однако, хотя химиотерапевтические агенты более эффективно уничтожают или повреждают злокачественные клетки, чем нормальные клетки, тот факт, что они причиняют вред нормальным клеткам, указывает на их большой токсический потенциал. Для того чтобы химиотерапия была эффективной, пациент должен находиться в хорошем физиологическом состоянии.

Лечение рака требует ингибирования множества факторов, включая пролиферацию клеток опухоли, метастатическое распространение раковых клеток в другие части тела, инвазию и вызванную опухолью реваскуляризацию, и усиления иммунологических ответов хозяина и цитотоксичности. Традиционные противораковые химиотерапевтические агенты часто выбираются на основании их цитотоксичности в отношении опухолевых клеток. Однако некоторые противораковые агенты оказывают неблагоприятные эффекты на иммунную систему пациента. К сожалению, для подавляющего большинства традиционных противоопухолевых агентов соотношение между эффективной дозой и токсической дозой, то есть терапевтический индекс, чрезвычайно мало. Таким образом, было бы очень выгодно, если бы терапию или лечение рака можно было бы развивать так, чтобы обеспечить нецитотоксическую защиту от факторов, которые могли бы привести к росту, развитию и метастазированию инвазивных раковых опухолей.

Настоящее изобретение относится к способу предупреждения и/или лечения первичных или метастатических неоплазм, при котором применяют аналоги жирных кислот по настоящему изобретению для лечения пациента, страдающего от рака.

Двумя существенными характеристиками рака являются инвазия и метастазирование. С одной стороны, микроинвазия базальной мембраны характеризует переход от неоплазии к раку, а с другой стороны, метастазы обычно приводят к смерти.

Инвазия первичной опухоли в нижележащую соединительную ткань происходит по стадиям, ей способствуют различные медиаторы, продуцируемые опухолевыми клетками. Опухолевые клетки, которые не проникают в базальную мембрану и остаются в границах эпителия, называют карциномой in situ.

Метастазы, с другой стороны, могут образовываться, когда циклирующие опухолевые клетки с прилипающими лимфоцитами и тромбоцитами накапливаются в капиллярах, и мембрана опухолевых клеток взаимодействует с эндотелием капилляров. Участки эндотелиального присоединения в капиллярах сокращаются, и лиганды опухолевых клеток связываются с рецепторами на эндотелиальной и базальной мембранах. Затем опухолевые клетки высвобождают коллагеназу IV, которая разрушает коллаген IV, главный компонент нижележащей базальной мембраны. Инвазия в субкапиллярную соединительную ткань достигается при помощи присоединения к гликопротеинам - ламинину и фибронектину при помощи высвобождения протеаз, которые разрушают матрикс, и при помощи секреции факторов подвижности и хемотаксиса. Клетки опухоли затем могут пролиферировать и синтезировать факторы агрегации тромбоцитов, такие как тромбоксаны и прокоагулянты, таким образом приводя к отложению фибринового кокона вокруг клеток. Такой кокон может защищать микрометастаз от атаки иммунной системы хозяина.

Виды рака, которые можно предупреждать и/или лечить при помощи композиций и способов по настоящему изобретению, включают саркомы и карциномы человека, например карциномы, например карциному толстой кишки, рак поджелудочной железы, рак груди, рак яичника, рак предстательной железы, фибросаркому, миксосаркому, липосаркому, хондросаркому, остеобластосаркому, хордому, ангиосаркому, эндотелиосаркому, лимфангиосаркому, лимфангиоэндотелиосаркому, синовиому, мезотелиому, опухоль Юинга, лейомиосаркому, рабдомиосаркому, плоскоклеточный рак, базально-клеточный рак, аденокарциному, карциному потовых желез, карциному сальных желез, папиллярную карциному, папиллярные аденокарциномы, цистаденокарциному, медуллярную карциному, бронхогенную карциному, почечно-клеточный рак, гепатому, карциному желчного протока, хориокарциному, семиному, эмбриональную карциному, опухоль Вильмса, рак шейки матки, опухоль яичка, карциному легкого, мелкоклеточную карциному легкого, карциному мочевого пузыря, эпителиальную карциному, глиому, астроцитому, медуллобластому, краниофарингиому, эпендимому, пинеалому, гемангиобластому, акустическую невриному, олигодендроглиому, менингиому, меланому, нейробластому, ретинобластому; лейкозы, например острый лимфоцитарный лейкоз и острый миелоцитарный лейкоз (миелобластный, промиелоцитарный, миеломоноцитарный, моноцитарный и эритролейкоз); хронический лейкоз (хронический миелоцитарный (гранулоцитарный) лейкоз и хронический лимфоцитарный лейкоз); и истинную полицитемию, лимфому (болезнь Ходжкина и неходжкинскую лимфому), множественную миелому, болезнь Вальденстрема и болезнь тяжелых цепей; но не ограничиваются ими. Конкретные примеры таких видов рака описаны в следующих ниже разделах.

Авторы изобретения показали, что соединение по настоящему изобретению уменьшает средний диаметр различных сфероидов и что объем опухоли у опухолей ВТ4Сn уменьшается. Кроме того, авторы изобретения показали, что общее выживание крыс с имплантированными опухолями, которых лечили тетрадецилтиоуксусной кислотой (ТТА), существенно повышается.

Таким образом, подтверждено, что аналоги жирных кислот по настоящему изобретению производят заметный эффект на рост, инвазию и метастазирование опухолей.

Тетрадецилтиоуксусная кислота (ТТА) является наиболее тщательно изученным соединением по настоящему изобретению, и авторы изобретения показали несколько выгодных эффектов в различных тест-системах in vitro и in vivo.

Подробное описание изобретения.

Настоящее изобретение раскрывает, что модифицированные аналоги жирных кислот в нецитотоксических концентрациях можно применять для лечения и/или предупреждения рака.

Настоящее изобретение относится к применению аналогов жирных кислот общей формулы (I):



где R1 представляет собой:

С1-С24алкен с одной или более чем одной двойной связью и/или одной или более чем одной тройной связью, и/или

С1-С24алкин, и/или

С 1-С24алкил либо алкил, замещенный в одном или нескольких положениях одним или более чем одним соединением, выбранным из группы, включающей фтор, хлор, гидрокси, С1 -C4алкокси, С1-C4алкилтио, С 2-С5ацилокси или С1-С4 алкил;

R2 представляет собой водород или С 1-C4алкил;

n представляет собой целое число от 1 до 12;

i представляет собой нечетное число и показывает положение относительно COOR2;

X i независимо друг от друга выбраны из группы, включающей О, S, SO, SO2, Se и СН2;

с условием, что по меньшей мере один из Xi не является СН 2,

или их солей, пролекарств или комплекса для приготовления фармацевтической композиции для лечения и/или ингибирования первичных и вторичных метастатических неоплазм.

Предпочтительные сейчас воплощения настоящего изобретения относятся к соединениям: тетрадецилтиоуксусная кислота (ТТА) и тетрадецилселеноуксусная кислота (TSA).

Более конкретно, изобретение относится к применению указанных соединений для ингибирования роста, инвазивных и метастатических свойств опухолей.

Следующий аспект изобретения относится к способу лечения и/или ингибирования первичных и вторичных метастатических неоплазм, при котором млекопитающему, нуждающемуся в этом, вводят эффективное количество аналогов жирных кислот общей формулы (I):



где R1 представляет собой:

С1-С24алкен с одной или более чем одной двойной связью и/или одной или более чем одной тройной связью; и/или

С1-С24алкин; и/или

С 1-С24алкил либо алкил, замещенный в одном или нескольких положениях одним или более чем одним соединением, выбранным из группы, включающей фтор, хлор, гидрокси, С1 -С4алкокси, С1-С4алкилтио, С 2-С5ацилокси или С1-С4 алкил,

R2 представляет собой водород или С 1-С4алкил;

n представляет собой целое число от 1 до 12;

i представляет собой нечетное число и показывает положение относительно COOR2;

X i, независимо друг от друга выбраны из группы, включающей О, S, SO, SO2, Se и СН2;

с условием, что по меньшей мере один из Xi не является CH 2;

или их соли, пролекарства или комплекса.

Лечение включает введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективной концентрации, которую поддерживают по существу непрерывно в крови животного в течение периода введения.

Фиг.1 показывает действие ТТА на сфероидный диаметр сфероидов D-54Mg.

Фиг.2 показывает действие ТТА на сфероидный диаметр сфероидов GaMg.

Фиг.3 показывает действие различных концентраций ТТА на сфероидный диаметр сфероидов D-54Mg.

Фиг.4 показывает действие ТТА на рост подкожно имплантированных опухолей ВТ4Сn.

Фиг.5 показывает действие ТТА на выживание крыс с интракраниально имплантированными опухолями ВТ4Сn.

Введение соединений по настоящему изобретению.

В качестве фармацевтического препарата соединения по настоящему изобретению можно вводить непосредственно млекопитающему любым подходящим способом, в том числе парентерально, интраназально, перорально или используя всасывание через кожу. Их можно вводить местно или системно. Конкретный путь введения каждого агента будет зависеть, например, от истории болезни животного.

Примеры парентерального введения включают в себя подкожное, внутримышечное, внутривенное, внутриартериальное и внутрибрюшинное введение.

В качестве общего предложения, суммарное фармацевтически эффективное количество каждого соединения, вводимого парентерально, на дозу предпочтительно будет находиться в пределах от примерно 5 мг/кг/сутки до 1000 мг/кг/сутки массы тела пациента, хотя, как замечено выше, это в большой степени будет находиться на усмотрении врача. Для ТТА ожидается, что предпочтительной является доза 100-500 мг/кг/сутки, а для TSA дозировка может, вероятно, находиться в пределах от 10 до 100 мг/кг/сутки.

При непрерывном предоставлении соединений по настоящему изобретению их типично вводят посредством 1-4 инъекций в сутки или посредством непрерывных подкожных инфузий, например, используя мини-насос. Можно также использовать раствор для внутривенного введения из контейнера.

В одном воплощении соединения по настоящему изобретению для парентерального введения обычно готовят препарат в виде стандартной лекарственной инъекционной формы (раствора, суспензии или эмульсии) путем смешения каждого с требуемой степенью чистоты с фармацевтически приемлемым носителем, то есть носителем, который является нетоксичным для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях и совместимым с другими ингредиентами препарата.

Обычно препараты готовят посредством приведения в контакт равномерно и тщательно каждого из соединений по настоящему изобретению с жидкими носителями или тонко измельченными твердыми носителями либо с теми и другими вместе. Затем, если необходимо, продукту придают форму требуемого препарата. Предпочтительно носитель является парентеральным носителем, более предпочтительно раствором, который изотоничен крови реципиента. Примеры таких носителей-растворителей включают воду, физиологический раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Безводные растворители, такие как жирные масла и этилолеат, также полезны по изобретению, так же, как и липосомы.

Носитель может соответственно содержать незначительные количества добавок, таких как вещества, которые повышают изотоничность и химическую стабильность. Такие материалы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях и включают буферы, такие как фосфат, цитрат, сукцинат, уксусная кислота и другие органические кислоты или их соли; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота; иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутаминовая кислота, аспарагиновая кислота или аргинин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая целлюлозу или ее производные, глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетраацетат (ЭДТА); сахарные спирты, такие как маннит или сорбит; противоионы, такие как натрий; и/или неионогенные поверхностно-активные вещества, такие как эфиры полиоксиэтиленовых жирных кислот, полоксамеры или полиэтиленгликоль (ПЭГ).

Для пероральных фармакологических композиций можно использовать такой материал носителя, как, например, вода, желатин, камедь, лактоза, крахмалы, стеарат магния, тальк, масла, полиалкенгликоль, вазелин и тому подобное. Такой фармацевтический препарат может находиться в виде стандартной лекарственной формы и может дополнительно содержать другие терапевтически полезные вещества или традиционные фармацевтические адъюванты, такие как консерванты, стабилизаторы, эмульгаторы, буферы и тому подобное. Фармацевтические препараты могут находиться в виде традиционных жидких форм, таких как таблетки, капсулы, драже, ампулы и тому подобное, в виде традиционных лекарственных форм, таких как ампулы с сухим веществом, а также как суппозитории и тому подобное.

Кроме того, соединения по настоящему изобретению соответствующим образом применяют в сочетании с другими способами лечения для борьбы с раком и его предупреждения.

Изобретение будет понято более полно при обращении к следующим примерам. Их не следует, однако, истолковывать как ограничение объема изобретения.

Экспериментальная часть.

Пример 1. Получение и характеристика соединений

Синтез 3-замещенных аналогов жирных кислот

Соединения, используемые по настоящему изобретению, в которых заместитель Xi=3 представляет собой атом серы или атом селена, можно получить согласно следующей общей методике:

Х представляет собой атом серы:

Тиозамещенное соединение, используемое согласно настоящему изобретению, можно получить по указанной ниже общей методике:



Соединение, содержащее серу, а именно тетрадецилтиоуксусную кислоту (ТТА) (СН3-(СН2)13-S-СН 2-СООН), получали, как показано в ЕР-345038.

Х представляет собой атом селена:

Селенозамещенное соединение, используемое согласно настоящему изобретению, можно получить по следующей общей методике:

1. Алкил-Hal+KseCN Алкил-SeCN...

2. Алкил-SeCN+BH4 - Алкил-Se-

3. Алкил-Se-+O 2 Алкил-Se-Se-Алкил

Это соединение тщательно очищали кристаллизацией из этанола или метанола.



5. Алкил-Se-+Hal-CH2-COOH Алкил-Se-CH2-COOH

Конечное соединение, например, в котором алкил представляет собой тетрадецил (СН 3-(СН2)13-Se-СН2-СООН (тетрадецилселеноуксусная кислота (TSA)), можно очищать путем кристаллизации из диэтилового эфира и гексана.

Другие соединения по изобретению можно синтезировать, как показано в патентных заявках заявителя PCT/NO99/00135 и NO 20001123.

Пример 2

Исследование токсичности ТТА

28-Дневное исследование токсичности на собаках согласно требованиям GLP (Good Laboratory Practice, Свод международных требований к лабораторным исследованиям) было проведено Corning Hazleton (Europe), Великобритания. Пероральное введение ТТА при уровнях доз до 500 мг/кг/сутки обычно хорошо переносилось. Некоторые параметры, относящиеся к липидам, были понижены у животных, получающих высокие дозировки. Это соответствует фармакологической активности ТТА. Не наблюдалось никаких признаков токсичности при уровнях доз от 50 до 500 мг/кг/сутки.

Covance Laboratories Limited, Великобритания провели тесты на мутагенную активность. Было сделано заключение, что ТТА и TSA не вызывают мутаций у штаммов Salmonella typhimurium и Escherichia coli. Более того, ТТА не оказался мутагенным при тестировании на клетках лимфомы мыши и L5178Y.

Концентрации соединений, протестированных на S. typhimurium и Е coli, составляли 3-1000 мг на чашку (ТТА), 2-5000 мг на чашку (TSA). Для клеток лимфомы мыши, L5178Y концентрация составляла 2,5-50 мг/мл.

TSA и ТТА, как обнаружили, не являются мутагенными в этих тестах. TSA и ТТА были протестированы на хромосомную аберрацию в культивируемых клетках яичников китайского хомячка и никаких аберраций тестируемые дозы (12-140 мг/мл) не вызвали.

Таким образом, соединения по настоящему изобретению являются потенциально полезными в качестве фармацевтических соединений в данном отношении.

Пример 3

Действие ТТА на рост сфероидов.

Многоклеточные опухолевые сфероиды получали путем посева 3×106 клеток в колбы для культивирования тканей с поверхностью 80 см2, с нанесенными 10 мл (KB/KJT=20 мл) раствора модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM), содержащего 0,75% агара (KB/KJT=3%). После 7 дней инкубирования сфероиды с диаметром от 100 до 300 мкм отбирали пастеровской пипеткой под стереомикроскопом. Размер сфероидов определяли при помощи инвертированного микроскопа с калибровочной сеткой в окуляре.

Чтобы сравнить действие различных аналогов жирных кислот на рост сфероидов опухоли, сфероиды как D-54Mg, так и GaMg, переносили по отдельности в планшеты с 24 лунками по 16 мм с нанесенными 0,5 мл 0,75%-ного DMEM-агара. D-54Mg и GaMg представляют собой линии клеток человека. Линия клеток D-54Mg получена из смешанной анапластической глиомы и была любезно предоставлена доктором Даррелом В. Бигнером, Duke University, Durham, North Carolina. Линия клеток GaMg была создана в нашей лаборатории и подробно описана в другом источнике (Bjerkvik et al.: Anticancer research 1998: vol 8, р.797-803). Сфероиды разделяли на 5 групп по 4 сфероида в каждой группе. Четыре группы обрабатывали различными аналогами жирных кислот при конечной концентрации жирных кислот либо 100, либо 250 мкМ. Пятая группа (контроль) не подвергалась никакой обработке. Объем покрывающей суспензии составлял 1,0 мл. Размеры сфероидов определяли каждый второй день посредством измерения двух ортогональных диаметров, используя инвертированный фазово-контрастный микроскоп с калибровочной сеткой в окуляре. Все это осуществляли в течение 14-дневного периода.

Результаты этих экспериментов представлены на фиг.1-3. Как показано, жирными кислотами обрабатывали сфероиды в течение 14-дневного периода. К контрольной группе (- -) никаких жирных кислот не добавляли. Величины представлены в виде средних значений ±SD (среднеквадратическое отклонение).

Фиг.1 показывает действие 250 мкМ ТТА (- -) и пальмитиновой кислоты (РА) на средний сфероидный диаметр (мкм) сфероидов D-54Mg.

Фиг.2 показывает действие 250 мкМ ТТА (- -) и РА на средний сфероидный диаметр (мкм) сфероидов GaMg.


Для изучения действия ТТА на рост сфероидов в зависимости от дозы 24 опухолевых сфероида из обоих линий клеток разделяли на 6 групп, которые обрабатывали 0, 50, 100, 150, 200 и 250 мкМ ТТА. Этот эксперимент проводили в среде SF-X (от Costar, Mass, USA) и результаты приведены на фиг.3.

Пример 4

Миграция клеток.

Действие аналогов жирных кислот на миграцию клеток изучали путем определения способности клеток мигрировать из сфероидов, которые были прикреплены к пластиковой поверхности. Сфероиды GaMg и D-54Mg диаметром от 200 до 300 мкм переносили по отдельности в планшеты с 24 лунками по 16 мм. Затем добавляли 1,5 мл DMEM с разными концентрациями различных аналогов жирных кислот. Через 3 дня культивирования образцы фиксировали 4% формальдегидом в забуференном фосфатом физиологическом растворе (PBS) и окрашивали 2% кристаллическим фиолетовым в 96% этаноле. Размер зоны разрастания определяли затем с помощью морфометрической системы "Контрон" (Kontron, Enhing, Germany). Авторы изобретения использовали сывороточную среду (DMEM) в этом исследовании из-за относительно свободного прикрепления клеток глиомы к пластиковой поверхности в среде SF-X. Миграционная способность клеток GaMg и D-54Mg сильно ингибировалась ТТА в концентрации 100 мкМ (результаты не представлены).

Пример 5

Действие ТТА на рост подкожно имплантированных опухолей ВТ4Сn

Самцов норвежских коричневых крыс BD IX получили из Gades Institute, Haukeland hospital, Берген, Норвегия. Их содержали в клетках парами и содержали при 12-часовом цикле свет/темнота и температуре 20±3°С. Во время экспериментов они весили 250-400 г. Их кормили имеющейся в продаже стандартной гранулированной пищей и обеспечивали водопроводной водой без ограничений. Тестируемые группы лечили ТТА, а контрольные группы лечили пальмитатом и/или карбоксиметилцеллюлозой (КМЦ).

ТТА вводили посредством перорально-желудочной интубации. ТТА и РА суспендировали в 0,5% (мас./об.) натрий-карбоксиметилцеллюлозе при конечной концентрации исходного раствора 75 мг/мл. Животным вводили раз в день дозу 300 мг/кг массы тела.

Крыс анестезировали 0,2 мл Hypnorm-Dormicum/100 г массы тела и внедряли опухоль in vivo путем подкожной инъекции в шею крысы 5×106 клеток опухоли (в 1 мл NaCl). Через 3-4 недели опухоль забирали и разрезали на кусочки ткани 2×2 мм. Кусочки использовали для внедрения подкожных опухолей в лапу. Крыс анестезировали 0,2 мл Hypnorm-Dormicum/100 г массы тела, делали надрез кожи и кусочек ткани вводили и внедряли приблизительно на 1 см ниже этого надреза кожи. Опухоли растили в течение 2 недель. Крыс лечили либо посредством перорально-желудочной интубации, либо посредством прямой инъекции в опухоль.

Измеряли объем опухолей (в лапе).

Фиг.4 показывает действие РА (- -) и ТТА (- -) на рост подкожно имплантированных опухолей ВТ4Сn.

Пример 6

Действие ТТА на выживание крыс с интракраниально имплантированными опухолями ВТ4Сn

Самцов норвежских коричневых крыс BD IX использовали, как описано в примере 5. ТТА вводили посредством перорально-желудочной интубации.

Опухоль имплантировали путем стереотаксической трансплантации. Крысам давали наркоз 0,4 мл Equithesin/100 г массы тела. Делали надрез кожи, кровь удаляли при помощи H2O2 и проводили трепанацию черепа, используя бормашину.

Отверстие от трепана находилось на 3,3 мм сзади венечного шва и 2,5 мм сбоку от стреловидного шва.

Клетки извлекали и подсчитывали, как описано выше, а затем разводили в DPBS до конечной концентрации 20000 клеток/мкл. 2 мкл суспензии клеток вводили шприцом Гамильтона с 0,7-миллиметровой иглой с конусообразным наконечником на глубину 2,8 мм. Кожу соединяли стальными скобками, и животных возвращали в свои клетки.

Фиг.5 показывает действие РА и ТТА на выживание крыс с интракраниально имплантированными опухолями ВТ4Сn.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение аналогов жирных кислот общей формулы (I)



где R1 представляет собой С1 -С24алкен с одной или более чем одной двойной связью и/или одной или более чем одной тройной связью, и/или С1 -С24алкин, и/или С1-С24алкил либо алкил, замещенный в одном или нескольких положениях одним или более чем одним соединением, выбранным из группы, включающей фтор, хлор, гидрокси, С1-С4алкокси, С 1-С4алкилтио, С2-С5ацилокси или C1-С4алкил;

R2 представляет собой водород или С1-С4алкил;

n представляет собой целое число от 1 до 12;

i представляет собой нечетное число и показывает положение относительно COOR2;

Xi независимо друг от друга выбраны из группы, включающей О, S, SO, SO2, Se и СН2, с условием, что по меньшей мере один из Xi не является СН 2,

или их соли или комплекса для приготовления фармацевтической композиции для предупреждения первичных и вторичных метастатических неоплазм и ингибирования вторичных метастатических неоплазм.

2. Применение по п.1, где указанное соединение представляет собой тетрадецил-тиоуксусную кислоту.

3. Применение по п.1, где указанное соединение представляет собой тетрадецил-селеноуксусную кислоту.

4. Применение по п.1 для ингибирования роста опухолей.

5. Применение по п.1 для ингибирования инвазии первичной опухоли в соединительную ткань.

6. Применение по п.1 для ингибирования метастатических свойств опухоли, то есть ингибирования образования вторичных опухолей.

7. Применение по п.1 для повышения общего выживания млекопитающих с опухолями.

8. Способ лечения и/или ингибирования вторичных метастатических неоплазм, при котором млекопитающему, нуждающемуся в этом, вводят эффективное количество аналогов жирных кислот общей формулы (I)



где R1 представляет собой С1 -С24алкен с одной или более чем одной двойной связью и/или одной или более чем одной тройной связью, и/или С1 -С24алкин, и/или С1-С24алкил либо алкил, замещенный в одном или нескольких положениях одним или более чем одним соединением, выбранным из группы, включающей фтор, хлор, гидрокси, С1-С4алкокси, С 1-С4алкилтио, С2-C5ацилокси или C1-С4алкил;

R2 представляет собой водород или C1-C4алкил;

n представляет собой целое число от 1 до 12;

i представляет собой нечетное число и показывает положение относительно COOR2;

Xi независимо друг от друга выбраны из группы, включающей О, S, SO, SO2, Se и СН2, с условием, что по меньшей мере один из Xi не является СН 2,

или их соли или комплекса.

9. Способ по п.8, где указанное соединение представляет собой тетрадецилтио-уксусную кислоту.

10. Способ по п.8, где указанное соединение представляет собой тетрадецилселе-ноуксусную кислоту.

11. Способ по любому из пп.8-10, при котором аналоги жирных кислот вводят таким образом, чтобы их терапевтически эффективная концентрация поддерживалась по существу непрерывно в крови млекопитающего в течение периода их введения.

12. Способ по любому из пп.8-11, где композиция указанных аналогов жирных кислот представлена в виде стандартных лекарственных форм.

Версия для печати
Дата публикации 25.05.2007гг


вверх