ИЗОБРЕТЕНИЕ
Патент Российской Федерации RU2262105

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ОПУХОЛИ ЮИНГА У ДЕТЕЙ

Имя заявителя:  
Имя изобретателя:  Новик В.И. (RU); Красильникова Л.А. (RU); Колыгин Б.А. (RU); Пунанов Ю.А. (RU)
Имя патентообладателя: ГУН НИИ онкологии им. проф. Н.Н. Петрова Минздрава РФ (RU) 
Адрес для переписки: 197758, Санкт-Петербург, Песочный, ул. Ленинградская, 68, ГУН НИИ онкологии им. проф. Н.Н. Петрова Минздрава РФ 
Дата начала действия патента:  2003.10.07 

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии. Способ заключается в том, что производится цитологическое исследование пунктата опухоли до лечения с целью верификации морфологического диагноза, мазки переокрашиваются по Фельгену и определяются средние показатели площади ядер опухолевых клеток в мкм2 и содержание ДНК в единицах плоидности (с) и показатель плоидности сравнивается с расчетным, который вычисляется по формуле M D=0,0357 MS. Если показатель плоидности меньше расчетного, то предполагают благоприятный прогноз заболевания. Если показатель плоидности больше расчетного, то предполагают неблагоприятный прогноз заболевания. Изобретение обеспечивает повышение точности прогноза.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии. 

Саркома Юинга является второй по частоте встречаемости опухолью костей у детей и подростков. Комплексное применение хирургического, лучевого и химиотерапевтического методов лечения и постоянное их усовершенствование приводят к увеличению продолжительности жизни больных с опухолью Юинга, однако показатели 5-летней выживаемости сравнительно невелики и составляют по данным разных авторов от 40 до 60%. Прогностическими факторами течения и исхода заболевания являются возраст больных, первичная локализация опухоли, объем опухоли, наличие или отсутствие метастазов во время установления диагноза, ответ опухоли на химиотерапию и др. Определение прогноза является важным этапом обследования больного, т.к. может существенно влиять на выбор лечебной тактики.

Исследования, проводившиеся с целью определить возможность использования плоидности ДНК опухолевых клеток для установления прогноза опухоли Юинга и выполненные как с помощью проточной цитофотометрии, так и анализа изображения, дали противоречивые результаты. Одни авторы (Kowal-Vera at al., 1992) не нашли корреляции между плоидностью ДНК, выживаемостью больных и гистологической формой опухоли Юинга, другие (Dierick at al., 1993) нашли, что плоидность ДНК является ценной прогностической информацией при опухолях Юинга.

В диагностике опухолей Юинга большое значение имеет цитологический метод исследования материала, полученного с помощью тонкоигловой аспирационной биопсии (ТАБ) опухоли. При этом методе почти во всех случаях удается получить обильный материал, достаточный для установления характера процесса, что снимает необходимость производить открытую биопсию, которая является небезопасной процедурой из-за возможности осложнений и распространения опухолевого процесса (Kumar et al., В.И.Новик и соавт., 1999, Ю.Н.Соловьев, 2002). Описаны особенности цитологических картин при опухолях Юинга. Многие авторы отмечают наличие 2-х типов опухолевых клеток - светлых, или главных, с более выраженной структурой ядерного хроматина и темных, или вторичных, с гиперхромными ядрами и плотно упакованным хроматином (Dahl at al., 1986, Mondal, Visra, 1996, О.А.Ерохина, Л.Б.Клюкина, А.Ч.Дубровский, 2000 и др.).

В качестве прототипа предлагаемого изобретения можно рассматривать работу D.Perotti и соавт. "Retrospective analysis of ploidy in primary osseous and extraosseous Ewing family tumors in children", опубликованную в журнале Tumori, 1998, 84, (4), Р.493-498. Авторы провели ретроспективный анализ содержания ДНК и плоидности опухоли у 27 больных с костными и внекостными опухолями семейства опухолей Юинга с помощью как проточной цитометрии, так и анализа изображения на суспензии опухолевых клеток из парафиновых блоков и свежезамороженной ткани первичной опухоли. Они установили, что выявление анэуплоидных опухолевых клеток было связано с плохим прогнозом заболевания. Однако небольшое количество случаев не позволило им сделать статистически значимые выводы.

Подобных работ, выполненных на цитологических препаратах, полученных при обследовании больного, нам найти не удалось.

Технический результат настоящего изобретения состоит в верификации клинического диагноза при цитологическом исследовании материала ТАБ и предположительного определения прогноза течения опухоли Юинга у детей.

Это достигается проведением цитологического исследования мазков, полученных с помощью пункции тонкой иглой опухоли до лечения. Мазки, окрашенные по Лейшману, оцениваются опытным цитологом визуально, после этого наиболее информативные из них обесцвечиваются и переокрашиваются по методу Фельгена и исследуются с помощью анализатора микроизображений. При визуальной оценке проводится дифференциальная цитологическая диагностика опухоли Юинга с другими новообразованиями. Применение анализатора микроизображений позволяет объективизировать цитологические данные путем определения морфометрических параметров ядер опухолевых клеток и оценки содержания ДНК.

Нами установлено, что наиболее информативными параметрами для разделения случаев с хорошим и плохим прогнозом опухоли Юинга являются площадь ядер опухолевых клеток и интегральная оптическая плотность их окраски (содержание ДНК). Эти параметры использованы для построения диаграммы в двухкоординатной плоскости, на которой отложены средние значения площадей ядер (MS) - в мкм 2 и содержание ДНК MD - в единицах плоидности "с" каждого наблюдения (чертеж). Прямая АА1 , уравнение которой имеет вид МD=0,0357 MS , с точностью 80,95% разделяет случаи опухолей Юинга с хорошим и плохим прогнозом заболевания. Таким образом, алгоритм определения прогноза заболевания можно представить следующим образом:

Если MD>0,0357 Ms, предполагается плохой прогноз заболевания,

Если MD<0,0357 Ms , предполагается хороший прогноз заболевания.

Сущность способа поясняется примерами.

ПРИМЕР 1. Больная Г., 9 лет, ИБ №3286 от 11.07.95 г. При цитологическом исследовании (№223146 от 13.07.95) материала ТАБ, полученного из опухоли (11 см в диаметре) малоберцовой кости установлен диагноз опухоли Юинга. Данные цитометричекого исследования: средняя площадь ядер опухолевых клеток - 153,6 мкм2, плоидность - 3,41 с. Показатель плоидности меньше, чем расчетный (0,0357×153,6=5,48 с), следовательно, предполагается хороший прогноз заболевания. У больной установлена II стадия заболевания, ей провели 1 курс предоперационной полихимиотерапии, операцию субтотальную резекцию малоберцовой кости (гист. исследование №О220186 от 12.10.95 - саркома Юинга) и 3 курса послеоперационной полихимиотерапии. Отмечен хороший ответ опухоли на химиотерапию. Больная жива в течение 8 лет наблюдения.

ПРИМЕР 2. Больной А., 10 лет, ИБ №2843 от 25.07.91 г. При цитологическом (№181660 от 30.07.91) и гистологическом (№Б 199932 от 30.07.91) исследованиях материала трепанбиопсии, полученного из опухоли (7 см в диаметре) большеберцовой кости, установлен диагноз опухоли Юинга. Данные цитометрического исследования: средняя площадь ядер опухолевых клеток - 61,4 мкм 2, плоидность - 3,1 с. Показатель плоидности больше, чем расчетный (0,0357×61,4=2,19 с), следовательно, предполагается плохой прогноз заболевания. У больного установлена II стадия заболевания. Ему выполнено 2 курса полихимиотерапии, курс лучевой терапии (51 Гр), повторный курс полихимиотерапии. Отмечен рост опухоли на фоне полихимиотерапии, метастазирование в головной мозг и в июне 1992 г. констатирована смерть.

Предлагаемый способ разработан при ретроспективной оценке клинических данных, данных цитологического и гистологического исследований, а также анализа цитометрических показателей у 21 ребенка с опухолью Юинга. В соответствии с данными прослеживания больных выделены 2 группы: 1) с хорошим прогнозом заболевания (все дети живы в период наблюдения от 3,5 до более 10 лет - 10 человек) и 2) с плохим прогнозом (все дети умерли в течение от 6 месяцев до 2 лет - 11 человек). Результаты сравнения цитометрических данных у больных с хорошим и плохим прогнозом заболевания представлены в таблице (статистическая достоверность вычислялась по методу хи-квадрат с поправкой Йетса). 

Сопоставления цитометрических данных у больных с хорошим и плохим прогнозом опухоли Юинга 
Цитометрические данные Хороший прогноз (n=10) Плохой прогноз (n=11) Р 
Плоидность меньше расчетной 8 2 
Плоидность больше расчетной 2 9 0,0166 


Способ по сравнению с известными имеет преимущество, заключающееся в том, что используется материал, полученный с помощью тонкоигловой аспирационной биопсии опухоли в период установления диагноза, исключается необходимость травматичной открытой биопсии опухоли. Полученный материал является достаточным как для установления цитологического диагноза, так и для проведения цитометрических исследований. Способ позволяет с точностью 80,95% определять предположительный прогноз опухоли Юинга.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ прогнозирования течения опухоли Юинга у детей, включающий цитологическое исследование материала тонкоигловой аспирационной биопсии и определение плоидности содержания ДНК с помощью анализа изображения, отличающийся тем, что вычисляют среднюю площадь ядер опухолевых клеток в мкм2 и содержание ДНК в единицах плоидности (с) и сравнивают показатель плоидности с расчетным, который определяется по формуле MD=0,0357 Ms, и при показателе плоидности меньше расчетного предполагают благоприятный прогноз заболевания, а при показателе плоидности больше расчетного предполагают неблагоприятный прогноз заболевания. 

Версия для печати
Дата публикации 25.05.2007гг


вверх