ИЗОБРЕТЕНИЕ
Патент Российской Федерации RU2254576

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ III-IV СТАДИЙ

Имя заявителя:  
Имя изобретателя:  Сидоренко Ю.С. (RU); Горошинская И.А. (RU); Владимирова Л.Ю. (RU); Немашкалова Л.А. (RU); Шалашная Е.В. (RU) 
Имя патентообладателя: Ростовский научно-исследовательский онкологический институт МЗ РФ (RU); Сидоренко Юрий Сергеевич (RU); Горошинская Ирина Александровна (RU); Владимирова Любовь Юрьевна (RU); Немашкалова Людмила Анатольевна (RU); Шалашная Елена Владимировна (RU) 
Адрес для переписки: 344037, г.Ростов-на-Дону, 14 линия, 63, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт МЗ РФ
Дата начала действия патента:  2003.03.03

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии. Сущность изобретения заключается в том, что у больных с исходно сниженной текучестью мембран в зоне белок-липидных контактов лимфоцитов на 31%, увеличенной погруженностью белков в липидный матрикс лимфоцитов на 103%, сниженным коэффициентом К-отношением светосуммы хемилюминесценции к активности церулоплазмина в плазме крови в 5-6 раз по сравнению с соответствующими показателями у здоровых женщин прогнозируют высокую эффективность лечения химиотерапией, у других больных с исходными значениями показателей структурно-функционального состояния мембран клеток крови, не отличающихся от нормы, и при изменении значений К не более чем в 3-3,5 раза прогнозируют низкую эффективность химиотерапии. Изобретение позволяет легко и быстро осуществить прогноз индивидуальной чувствительности больных к химиотерапии.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, к биохимическим исследованиям, и может быть использовано для прогнозирования и определения эффективности применяемого противоопухолевого лечения рака молочной железы III-IV стадий и индивидуального подхода к выбору тактики лечения больных.

Известен "Способ прогнозирования эффективности терапии больных раком яичников III-IV стадий (см. авт. свид. №1805393 от 30.03.93. Бюл. №12). Сущность способа заключается в том, что исследуют бласттрансформацию лимфоцитов в присутствии фитогемаглютинина и конканавалина А, определяют количество теофиллинчувствительных и теофиллинрезистентных клеток, вычисляют их соотношение и при отношении уровня бласттрансформации в присутствии фитогемаглютинина к уровню бласттрансформации в присутствии конканавалина А, равном 1,45-1,6, и при отношении количества теофиллинчувствительных к теофиллинрезистентным клеткам, равном 0,3-0,4, прогнозируют эффективность терапии, а при отношении уровня бласттрансформированных клеток в присутствии фитогемаглютинина к уровню бласттрансформации в присутствии конканавалина А, равном 0,7-1,0, и при отношении количества теофиллинчувствительных к теофиллинрезистентным клеткам, равном 0,7, - прогнозируют отсутствие терапевтического эффекта. Использование способа повышает точность прогноза. К недостаткам способа следует отнести его специфичность для рака яичников, длительность выполнения исследования, использование дорогостоящих наборов и аппаратуры для выполнения иммунологических исследований.

Известен "Способ прогнозирования результатов лекарственной терапии у больных раком молочной железы" (см. Ю.Н.Бордюшков, А.И.Верховцева, С.С.Миндлин, Т.М.Косинская, Л.И.Малютина. Изучение возможностей прогнозирования эффективности противоопухолевой терапии на основании исходных нейроэндокринных показателей. Сб. Аутолимфохимиотерапия и другие вопросы онкологии. М., 1997. С.178-183). Прогнозирование осуществляют по дискриминантной функции с использованием 6 показателей (3 гормонов и 3 катехоламинов), определяемых в суточной моче больных: суммарные 17-кетостероиды (17-КС), 3-я фракция 17-КС - дегидроэпиандростерон, 5-я фракция 17-КС - эпиохоланолон, дофамин, норадреналин, адреналин. Авторы декларируют информативность предлагаемой дискриминантной функции. Однако определение шести указанных параметров делает данный способ прогнозирования чрезвычайно трудоемким, удлиняет время проведения анализа до 2-х недель, требует дополнительных реактивов, включая органические растворители, вредные для медперсонала.

Целью изобретения является определение индивидуальной чувствительности к проводимой химиотерапии и прогнозирование эффективности лечения.

Поставленная цель достигается тем, что у больных с исходно сниженной текучестью мембран в зоне белок-липидных контактов лимфоцитов на 31%, увеличенной погруженностью белков в липидный матрикс лимфоцитов на 103%, сниженным коэффициентом К - отношением светосуммы хемилюминесценции к активности церулоплазмина в плазме крови в 5-6 раз по сравнению с соответствующими показателями у здоровых женщин прогнозируют высокую эффективность лечения химиотерапией, у других больных с исходными значениями показателей структурно-функционального состояния мембран клеток крови, не отличающимися от нормы, и меньшей степенью изменений свободнорадикальных процессов, прогнозируют низкую эффективность химиотерапии.

Изобретение "Способ прогнозирования эффективности лечения больных раком молочной железы III-IV стадий" является новым, так как оно неизвестно из уровня медицины в области биохимических исследований в онкологии при лечении рака молочной железы.

Новизна изобретения заключается в том, что у больных с исходно сниженной текучестью мембран в зоне белок-липидных контактов лимфоцитов на 31%, увеличенной погруженностью белков в липидный матрикс лимфоцитов на 103%, значениями коэффициента К в 5-6 раз ниже нормы и при изменении этих показателей в сторону нормализации после проведенной химиотерапии констатируют высокую эффективность лечения; у больных с исходными нормальными значениями показателей структурно-функционального состояния мембран клеток крови, менее выраженным изменением коэффициента К и снижением текучести мембран при отсутствии достоверных изменений других показателей после проведенной химиотерапии констатируют низкую эффективность лечения. 

Исследование мембран с помощью флуоресцентных зондов позволяет получить важную информацию о структурном состоянии мембран. Параметры флуоресценции зонда, введенного в мембрану, зависят от физико-химических свойств его непосредственного микроокружения в мембранах: текучести, полярности среды, близости заряженных групп, наличия различных молекул-акцепторов, энергии электронного возбуждения, диффузии молекул-тушителей флуоресценции (см. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М.: Наука. 1980. 320 с.; Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов. М.: Наука. 1989. 276 с.). С использованием гидрофобного зонда пирена изучали текучесть мембран лимфоцитов и эритроцитов в зонах белок-липидных контактов и липидного бислоя и погруженность белков в липидный матрикс. Текучесть является комплексным показателем, отражающим как структуру, так и основные свойства липидной составляющей мембран и зон белок-липидных взаимодействий, ей принадлежит ключевая роль в регуляции всех процессов, протекающих в клеточных мембранах. Текучесть характеризует не только состояние мембран, но и их способность реагировать на изменения, происходящие в организме в ответ на развитие злокачественного процесса и воздействие химиопрепаратов (см. Дятловицкая Э.В. Сфинголипиды и злокачественный рост. Биохимия. 1995. Т. 60. №6. С.843-850; Shinitzky M. Membrane fluidity in malignancy adversative and recuperative. Biochim. Biophys. Acta. 1984. Vol. 738. P.251-261; Pop D.A., Jucu V. Membrane microviscosity in cell/virus systems. Romanian J. of Virology. 1993. Vol. 44. №.1-2. P.79-83). Оценка погруженности белков в липидный матрикс позволяет судить об ассоциации белков с мембранами, а также об олигомеризации мембранных белков, одной из причин которой может быть их окислительная модификация (см. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов. М.: Наука. 1989. 276 с.). В тесных причинно-следственных взаимоотношениях с состоянием мембран находятся процессы свободнорадикального перекисного окисления липидов и активность антиокислительной защиты. Информативными показателями состояния организма являются интенсивность хемилюминесценции, отражающая уровень гидроксильного и супероксидного радикалов, и активность церулоплазмина - основного белкового антиоксиданта плазмы крови.

Изобретение является промышленно применимым, так как может быть воспроизведено в здравоохранении, в медицинских учреждениях, занимающихся лечением больных раком молочной железы с использованием биохимических исследований, научно-исследовательских онкологических институтах, онкодиспансерах. 

"Способ прогнозирования эффективности лечения больных раком молочной железы III -IV стадий" выполняется следующим образом.

В крови больных до начала лечения и через 2 недели после окончания курса химиотерапии определяют в лимфоцитах текучесть мембран в зоне белок-липидных контактов и погруженность белков в липидный матрикс, а в плазме крови светосумму хемилюминесценции в системе перекись водорода - люминол и активность церулоплазмина, вычисляют отношение величины светосуммы хемилюминесценции к активности церулоплазмина (коэффициент К). Текучесть и погруженность оценивают с использованием зонда пирена (см. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М.: Наука. 1980. 320 с.). Исследование в плазме крови люминолзависимой хемилюминесценции, индуцированной перекисью водорода, проводят по методу Шестакова В.А. и соавт. (см. Хемилюминесценция в плазме крови в присутствии перекиси водорода. Вопросы медицинской химии. 1979. Т.25. Вып.2. С.132-137). Оксидазную активность церулоплазмина определяют по окислению п-фенилендиамина (см. Колб В.Г., Камышников B.C. Справочник по клинической химии. Минск, 1982. С.217-220). 

Результаты исследования текучести и погруженности мембран лимфоцитов, а также величины отношения светосуммы хемилюминесценции к активности церулоплазмина в крови больных раком молочной железы представлены в таблице.

Каждый из предлагаемых показателей позволяет судить об эффективности проводимой химиотерапии, однако наиболее полная картина наблюдается при проведении комплексного исследования, включающего оценку как показателей состояния мембран, так и системы свободнорадикального окисления, что позволяет повысить точность прогноза эффективности лечения.



Из таблицы видно, что после проведения химиотерапии для больных с высокой эффективностью лечения - 100% регрессия опухоли (которую, по нашим данным, можно прогнозировать по фоновому уровню изученных показателей) характерна нормализации текучести и погруженности и значительная корреляция соотношения свободнорадикальных процессов и антиоксидантной активности, в то время как у больных с низкой эффективностью лечения - стабилизацией процесса после проведенной химиотерапии наблюдается снижение текучести мембран при отсутствии нормализации других показателей. Больные с частичной регрессией опухоли занимают промежуточное положение по уровню определяемых показателей.

Примеры конкретного применения "Способа прогнозирования эффективности лечения больных раком молочной железы III-IV стадий".

Пример №1.

Больная С., 59 лет, и.б. №12924/н, находилась на лечении в РНИОИ с 19.09.01 по 11.10.01 с жалобами на образование в правой молочной железе. При обследовании в нижневнутреннем квадранте правой молочной железы опухоль 8х7 см у переходной складки, экзофит синюшного цвета, кожа над ним напряжена, блестящая, опухоль относительно грудной стенки малоподвижна. В нижних квадрантах железы кожа гиперемирована, положителен симптом лимонной корочки. Ареола умеренноинфильтрирована, сосок не изменен. В подмышечной области малосмещаемый конгломерат лимфоузлов размером 8×7 см. Дальнейшее клинико-лабораторное обследование данных о наличии отдаленных метастазов не выявило. Поставлен диагноз: рак правой молочной железы, узловая форма с экзофитным ростом, вторичным отеком, метастазами в подкрыльцовые лимфоузлы (Т4N2 Mx). Стадия III группа II. Диагноз верифицирован цитологически (№22416-19) - умеренно дифференцированная карцинома.

При обследовании по предлагаемой программе получены следующие результаты: до начала лечения текучесть мембран лимфоцитов в зоне белок-липидных контактов - 0,992, погруженность белков в липидный матрикс лимфоцитов - 0,103; светосумма хемилюминесценции - 3459 имп. за 6 сек, активность церулоплазмина - 1,563 мкмоль/л, в результате чего коэффициент К равен 2213. Представленные результаты биохимического исследования предполагают невысокую эффективность химиотерапии.

С 28.09 по 10.10.01 и с 8.11 по 18.11.01 проведено 2 курса химиотерапии по схеме CMFAV, тамоксифен 20 мг в сутки. В результате отмечено уменьшение гиперемии и отека кожи, экзофит уплостился, побледнел, однако регрессия опухоли составила <25%, опухоль оставалась малоподвижной. После первого курса химиотерапии текучесть мембран лимфоцитов - 0,581, погруженность белков в липидный матрикс лимфоцитов - 0,230; светосумма хемилюминесценции -2608 имп. за 6 сек, активность церулоплазмина - 1,575, что соответствует коэффициенту К, равному 1656, т.е. наблюдалось ухудшение показателей по сравнению с фоновыми. В связи с незначительным сокращением опухоли при выполнении оперативного лечения радикальная мастэктомия по Пейти справа была дополнена резекцией большой грудной мышцы. Гистоанализ №630312-13 от 24.12.02 - инфильтрирующий протоковый рак. №630314-23 - метастазы рака в подкрыльцовые, подлопаточные, подключичные лимфоузлы. После операционного лечения отмечался участок краевого некроза, в связи с чем заживление вторичным натяжением. Не исключен местный рецидив. 

Пример №2

Больная К., 69 лет, и.б. №13075/л находилась на лечении в РНИОИ с 3.12.01 по 26.12.01 с жалобами на образование в левой молочной железе. При осмотре левая молочная железа деформирована за счет образования с плотным экзофитом в верхневнутреннем квадранте, размером до 5 см в диаметре, выступающим над поверхностью кожи до 3 см, опухоль 7×8 см, яркая гиперемия кожи всей молочной железы. В подмышечной области слева увеличенный лимфоузел до 2 см, ограничено подвижный. Дальнейшее клинико-лабораторное обследование данных о наличии отдаленных метастазов не выявило. При пробной биопсии №26590-26601 - умеренно дифференцированная карцинома. Поставлен диагноз: рак левой молочной железы экзофитная форма с метастазами в левые подмышечные лимфоузлы (T4N 2Mx). Стадия III группа II.

При обследовании по предлагаемой программе получены следующие результаты: до начала лечения текучесть мембран лимфоцитов в зоне белок-липидных контактов - 0,489, погруженность белков в липидный матрикс лимфоцитов - 0,360; светосумма хемилюминесценции - 1101 имп. за 6 сек, активность церулоплазмина - 1,129 мкмоль/л, в результате чего коэффициент К равен 975. Результаты биохимического исследования предполагали высокую чувствительность к химиотерапии.

С 8.12 по 17.12.01 и с 10.01 по 17.01.02 проведено 2 курса химиотерапии по схеме CMFAV, тамоксифен 20 мг в сутки ежедневно. В результате лечения отмечена выраженная регрессия опухоли и лимфоузлов, составившая по критериям ВОЗ 89%. Экзофит и гиперемия регрессировали полностью. После первого курса химиотерапии текучесть мембран лимфоцитов - 0,753, погруженность белков в липидный матрикс лимфоцитов - 0,080; светосумма хемилюминесценции - 3076 имп. за 6 сек, активность церулоплазмина - 0,837 мкмоль/л, что соответствует коэффициенту К, равному 3675, т.е. наблюдалась коррекция биохимических показателей. 

Больной 1.03.02 выполнена радикальная мастэктомия по Пейти слева. Гистоанализ №639672-78 - на месте опухоли тотальный некроз опухолевой ткани, в лимфоузлах гиперплазия лимфоидной ткани, метастазов рака нет. Это свидетельствует о IV стадии лечебного патоморфоза и высокой эффективности лечения. В послеоперационном периоде проведена дистанционная гамма-терапия на левую молочную железу и пути лимфооттока, курсы адьювантной химиотерапии и гормонотерапия тамоксифеном 20 мг в сутки. Признаков рецидивов и метастазов нет.

Технико-экономическая эффективность "Способа прогнозирования эффективности лечения больных раком молочной железы III-IV стадий" заключается в том, что биохимические исследования при лечении рака молочной железы позволяют прогнозировать индивидуальную чувствительность больных к химиотерапии, осуществить выбор рационального лечения, избежать использования малоэффективных методов лечения, сократить расходы на лекарственные средства. Предлагаемые исследования легко и быстро выполнимы и не требуют больших материальных затрат.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ прогнозирования эффективности лечения больных раком молочной железы, включающий биохимическое исследование биологической жидкости пациента, отличающийся тем, что исследуют кровь до начала химиотерапевтического лечения и через 2 недели после него, при этом в лимфоцитах определяют текучесть мембран в зоне белок-липидных контактов и погруженность белков в липидный матрикс, а в плазме крови - светосумму хемилюминесценции в системе перекись водорода - люминол и активность церулоплазмина, вычисляют коэффициент К как отношение величины светосуммы к активности церулоплазмина и при исходно сниженной текучести мембран в среднем на 31%, увеличенной погруженности белков на 103%, сниженном коэффициенте К в 5-6 раз по сравнению с соответствующими показателями у здоровых женщин, прогнозируют высокую эффективность лечения химиотерапией, а при значениях показателей лимфоцитов, не отличающихся от нормы, и при изменении значений К не более чем в 3-3,5 раза прогнозируют низкую эффективность лечения.

Версия для печати
Дата публикации 25.05.2007гг


вверх