СПОСОБ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ГЕСТОЗА

СПОСОБ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ГЕСТОЗА


RU (11) 2309412 (13) C1

(51) МПК
G01N 33/84 (2006.01)
G01N 33/68 (2006.01) 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 07.12.2007 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(21) Заявка: 2006101754/15 
(22) Дата подачи заявки: 2006.01.23 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2006.01.23 
(45) Опубликовано: 2007.10.27 
(56) Список документов, цитированных в отчете о поиске: RU 2190848 С2 10.10.2002. RU 2143694 C1 27.12.1999. JP 2005098805 А 14.04.2005. UA 69237 A 16.08.2004. ВОРОНИНА Е. А. Железосодержащие белки крови как критерий ранней диагностики гестоза и прогнозирования степени его тяжести: Автореф. дис. к.м.н. - Омск, 2002, 25 с. Найдено из БД VINITI. [найдено 27.01.2006]. [он-лайн]. LESZCZYNSKA-GORZELAK В. et
al. Serum level of endothelin-1 and -2 in pregnancies complicated by EPH gestosis. Gynecol. Obstet Invest. 1997, 43(1), p.37-40, реф. Найдено из БД PubMed, PMID 9015697. [найдено 28.09.2006]. [он-лайн]. ДАВИДОВИЧ И.М. и др. Артериальная гипертония и беременность: механизмы формирования, эффективность амлодипина (Нормодипина). - Русский медицинский журнал. 2003, Т.11, №4. Найдено из БД Интернет.http://www.rmj.ru/rmj/t11/n4/197.htm. [найдено 01.10.2006] [он-лайн].

(72) Автор(ы): Орлов Александр Владимирович (RU); Крукиер Ирина Ивановна (RU); Погорелова Татьяна Николаевна (RU); Друккер Нина Александровна (RU); Афонина Тамара Андреевна (RU) 
(73) Патентообладатель(и): ФГУ "Ростовский НИИ акушерства и педиатрии РОСЗДРАВА" (RU) 
Адрес для переписки: 344012, г.Ростов-на-Дону, ГСП-704, ул. Мечникова, 43, РНИИАП, патентный отдел 

(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ГЕСТОЗА

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и найдет широкое применение для оценки степени тяжести гестоза. Сущность способа: начиная с 5 недель беременности, в сыворотке крови определяют содержание эндотелина-1 (ЭТ-1) и метаболитов оксида азота (нитриты и нитраты - NOx). При содержании NOx от 20,9 до 24,8 мкмоль/л, а ЭТ-1 от 0,7 до 3,9 пкг/мл делают вывод о развитии гестоза легкой степени, а при величине NOx от 24,8 до 49,6 мкмоль/л, а ЭТ-1 от 4,0 до 8,3 пкг/мл диагностируют гестоз средней тяжести. Использование способа дает возможность повысить точность оценки степени тяжести гестоза на ранних стадиях и, соответственно, позволяет снизить фармакологическое воздействие на мать и плод за счет назначения своевременной терапии гестоза, соответствующей его степени тяжести. 1 табл.




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и найдет широкое применение для объективного прогнозирования различной степени тяжести гестоза.

До настоящего времени существует проблема в прогнозировании степени тяжести гестоза, являющегося одним из тяжелых осложнений беременности, которое занимает ведущее место среди причин материнской и перинатальной смертности (С.Д.Моцарь, В.В.Малюк. Состояние системы гомеостаза у беременных с гестозом на фоне применения фраксипарина (http://www.placenta.mk.ua/spek.next.html).

Лечение гестоза направлено на устранение генерализованного спазма сосудов, снижение АД, нормализацию общей гемодинамики и микроциркуляции в жизненно важных органах, коррекцию метаболических нарушений и восстановление гомеостаза, чем достигается необходимый уровень жизнедеятельности плода.

Своевременная диагностика выраженности нарушений при гестозе (степени тяжести данного осложнения беременности) лежит в основе выбора терапии, необходимой для данного вида гестоза, позволяющей адекватно влиять на клинические проявления без ущерба для плода.

Анализ патентной и научно-медицинской литературы позволил установить, что для диагностики гестоза в настоящее время предложены тесты, относящиеся к физиологическим, морфологическим, иммунологическим и биохимическим методам исследования.

В работе А.Н.Стрижакова, О.Р.Баева, И.В.Игнатко (Прогнозирование развития гестоза и фетоплацентарной недостаточности. Российский Вестник акушера-гинеколога. T.1. N1. 2001. С.39-43) подчеркивается возможность прогнозирования гестоза при допплерометрических исследованиях в 20-21 недель, когда наблюдается повышение допплерометрических индексов сосудистой резистентности в системе маточных и пуповинных артерий. В спиральных артериях эти изменения отмечены в 16-19 недель.

К биохимическим можно отнести следующие аналоги:

- авторское свидетельство СССР №1358936, 1987, в котором указывается, что, проводя фотометрию безбелковой плазмы при длине волны 254 нм и увеличении оптической плотности более чем на 13%, диагностируют токсикоз,

- авторское свидетельство СССР №1337778, 1987, согласно которому определяют в периферической крови время гемолиза эритроцитов, процент гибели клеток и уровень свободного гемоглобина плазмы, позволяющие диагностировать гестоз и его различные степени,

- авторское свидетельство СССР №1572534, 1990 по определению уровней липидов и фосфолипидов в критические для беременности сроки, показатели которых повышаются при токсикозе беременности,

- патент РФ №1612263, 1990 - определяют в сыворотке крови беременной активность супероксиддисмутазы (СОД) и диагностируют наличие гестоза,

- патент РФ №2021607, 1994 - в основе диагностики позднего гестоза лежит расчет интоксикационного индекса, составными показателями которого являются содержание мочевины в сыворотке крови, концентрация молекул средней массы и содержание тромбоцитов; сроки диагностики возможны с 27 недель беременности,

- патент РФ №2040794, 1995 г. - определение резистентности эритроцитов к ряду гемолитиков; сроки возможной диагностики с 23 недель беременности,

- патент РФ №2133037, 1999 предлагается определение в плазме крови активности катепсина G, что дает возможность диагностировать гестоз,

- патент РФ №2138817, 1999 - определение слюно-спермального глобулина в слюне беременных женщин в период с 28 недельного срока позволяет диагностировать поздний гестоз,

- патент РФ №2190848, 2002, в котором указывается на периодическое исследование крови спектрально-флуоресцентным анализом экстракта копропорфиринов и протопорфиринов эритроцитов, и при величине отношения их менее 10 диагностируют гестоз,

- имеются сведения о снижении количества -фетопротеина в сыворотке крови беременной адекватно степени тяжести гестоза (В.Г.Левченко и соавт. Альфа2-фетопротеин при неосложненной беременности и гестозе: www.soramn.ru/Journal/2004/№4),

- патент РФ №2263913, 2005 - по определению активности катепсина Д в венозной крови с 6-13 недель и при ее повышении прогнозируют развитие гестоза в III триместре.

Указанные способы диагностики гестоза обладают существенными недостатками:

1. Осуществление диагностики гестоза начиная только с 16-19 недель беременности, без учета степени тяжести.

2. Использование биохимических маркеров, отражающих метаболические изменения, являющиеся следствием гестоза.

3. Оценка мембранных нарушений, доступных для исследования клеток, изменение которых может иметь место не только при гестозах, но и при дефиците глюкозо-6-фосфатдегидрогиназы.

4. В ряде способов имеет место низкая точность метода.

5. Использование лизосомальных ферментов, отражающих активность свободнорадикальных процессов для прогнозирования гестоза не оправдана, т.к. повышение их активности не специфично для гестоза и имеет место при различных заболеваниях.

Прототипом данного изобретения избран "Способ прогнозирования гестоза" (патент РФ №22492212, 2005 г.).

Сущность способа-прототипа состоит в том, что в плазме крови беременной в ранние сроки (с 5 недель гестации) определяют уровень карбонильных производных белков и при величине, равной 51,7 ед. оптической плотности на 1 г белка (51,7 ед. оп. пл. на г/белка), прогнозируют развитие гестоза.

Данный способ, как и предыдущие, обладает тем же рядом несовершенств.

Указанные недостатки устраняются в заявляемом способе.

Задача изобретения: разработка способа, позволяющего в ранние сроки беременности оценить степень гестоза с целью назначения дифференцированного лечения.

Поставленная задача решается тем, что с 5 недель беременности в сыворотке крови женщины определяют биохимические соединения эндотелин-1 (ЭТ-1) и метаболиты оксида азота (нитриты и нитраты), при их величине, обозначаемой NOx от 20,9 до 24,8 мкмоль/л, а ЭТ-1 от 0,7 до 3,9 пкг/мл оценивают развитие гестоза легкой степени, а при величине NOx от 24,8 до 49,6 мкмоль/л, а ЭТ-1 от 4,0 до 8,3 пкг/мл диагностируют гестоз средней тяжести.

Технический результат, достигаемый изобретением, состоит в том, что повышается точность способа, его работоспособность, достигнуто упрощение способа, снижается фармакологическое воздействие на мать и плод за счет назначения своевременной, соответствующей степени тяжести гестоза терапии.

Ведущим звеном патогенеза гестоза является эндотелиальная дисфункция. Последняя характеризуется нарушением продукции факторов, обеспечивающих физиологическое состояние кровеносных сосудов. К ним относятся важнейший вазодилататор - оксид азота (NO) и вазоконстриктор - эндотелин-1 (ЭТ-1).

Маркерами дисфункции эндотелия могут служить вазоактивные соединения, регулирующие сосудистый тонус и гемостаз. К таким соединениям относятся эндотелин-1 и оксид азота, оказывающие противоположное влияние на указанные процессы: эндотелин, как известно, обладает выраженным вазоконстрикторным действием, а оксид азота - вазодилататорным (А.Ф.Ванин, 1998; М. - К.Стокле и соавт., 1998). Неадекватное образование вазоактивных веществ, отражающее степень метаболической модификации в эндотелии, является объективным показателем тяжести возможного развития гестоза, так как нарушение физиологического соотношения оксида азота и эндотелина приводит к снижению скорости кровотока в маточных артериях, что вполне может быть инициирующим фактором развития гестоза. Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими клиническими примерами:

Пример 1. Беременная С-ва, 26 лет, История болезни №31 от 2.08.05 г.

Обследовалась амбулаторно. Первобеременная. Д-з: беременность 5 нед.

Пациентке проведено УЗИ, определено содержание в сыворотке крови хорионического гонадотропина, подтвердившее наличие маточной беременности. Также осуществлено определение оксида азота (NO) по количеству его метаболитов (NO2 - и NO3 -) с помощью реакции Грисса. Для этого к 0,4 мл сыворотки крови приливают 0,8 мл 10% раствора ZnSO4 и 0,8 мл 0,5 N раствора NaOH. После чего центрифугируют 10 минут в рефрижераторной центрифуге при 3000 об/мин (t +6°C). Центрифугат отбираем и к нему прибавляем коммерческий реактив Грисса 1:1. Через 10 минут измеряют оптическую плотность этой пробы при 530 нм в кювете с толщиной слоя 1 см на спектрофотометре (СФ-530, Россия) против контроля, которым служила проба, обработанная аналогичным образом, но содержащая вместо сыворотки дистиллированную воду. Содержание NOx рассчитывают по предварительно построенному калибровочному графику. Результаты выражают в мкмолях NOx на 1 л сыворотки. Уровень NOx составил 24,8 мкмоль/л, а эндотелина-1 - 8,3 пкг/мл. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что у данной беременной развился гестоз средней тяжести. При физиологической беременности уровень NOx варьирует от 17,5 до 20,8 мкмоль/л; эндотелина - от 0,4 до 0,69 пкг/мл.

Определение содержания эндотелина (ЭТ-1) в сыворотке крови проводили иммуноферментным методом с помощью наборов фирмы DRG International, Inc. (USA). Полученные результаты позволяют заключить, что у беременной имеет место гестоз средней тяжести.

Принято решение начать общепринятые лечебные мероприятия, направленные на устранение гестоза, для чего женщина была госпитализирована в отделение патологии беременных ФГУ РНИИАП.

Стационарное лечение продолжалось 21 день, после чего 23.08.05 г. у женщины в сыворотке крови проведено определение метаболитов NO (NO2 - и NO3 -), а также эндотелина. Величина NOx достигала 20,8 ммоль/л, а концентрация эндотелина была равна 0,4 пкг/мл, что свидетельствовало о соответствии данных показателей цифрам, характерным для физиологической беременности.

30.09.05 г. женщина поступила на амбулаторный прием. Диагноз: Беременность 14 недель.

Проведенное определение в сыворотке крови оксида азота (NO2 - и NO2 -) и эндотелина показало, что уровень NO равен 17,5 мкмоль/л, а эндотелина - 0,69 пкг/мл, что свидетельствовало об отсутствии гестоза.

Данный клинический пример показывает работоспособность метода оценки степени тяжести гестоза. Регулярный контроль за состоянием женщины в течение всего периода гестации способствовал нормальному течению беременности и рождению здорового ребенка.

Пример 2. Больная М-кова. История болезни №1002. 4.07.05 г. обследовалась амбулаторно. Диагноз: Беременность 5 недель и 3 дня.

Наряду с общеклиническими методами обследования проведено определение содержания в сыворотке крови NOx и ЭТ-1. Уровень NOx соответствовал 20,9 мкмоль/л, а эндотелина - 3,9 пкг/мл.

Полученные данные определения у женщины в сыворотке крови NOx и ЭТ-1 позволяют считать, что у данной беременной наблюдается гестоз легкой степени.

19.07.05 г. проведено повторное обследование. Уровни NOx и ЭТ-1 в сыворотке крови достигали 24,8 мкмоль/л и 0,7 пкг/мл соответственно, что свидетельствовало о развитии гестоза легкой степени. Данные показатели подтверждались клиническими признаками: рвотой, сонливостью, периодически появляющейся головной болью.

Принято решение о проведении терапии, соответствующей легкой степени гестоза, что дает возможность минимизировать лекарственное воздействие на плод. Данный клинический пример показывает работоспособность предлагаемого метода для оценки степени тяжести гестоза и дифференцированного назначения терапии. Роды произошли в срок, спонтанно и завершились рождением здорового ребенка.

Пример 3. Больная Г-ян, 22 года. История болезни №846. 12.01.05 г. Диагноз: беременность 5 недель.

После общепринятого обследования дополнительно проведено определение NOx и эндотелина в сыворотке крови. Величина NOx была равна 17,5 мкмоль/л, а эндотелина - 0,4 пкг/мл.

Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии предрасположенности к развитию гестоза.

Последующее наблюдение за женщиной до наступления родов, которые произошли 30.10.05 г., подтвердило отсутствие развития гестоза.

Таким образом, приведенные клинические наблюдения свидетельствуют о том, что определение NOx и эндотелина в сыворотке крови позволяет прогнозировать развитие гестоза как легкой, так и средней степени тяжести.

По заявляемому способу обследовано 63 беременных; у 14 из них имел место гестоз легкой степени, у 26 - средней тяжести и у 23 беременность протекала без осложнений.

У обследованного контингента беременных содержание NOx в сыворотке крови от 24,9 мкмоль/л до 49,6 мкмоль/л, а эндотелина - от 4,0 пкг/мл до 8,3 пкг/мл обнаружено у 26 пациенток (1 группа), у которых развился гестоз средней степени тяжести. У 14 обследованных (2 группа) содержание NOx в сыворотке крови было в пределах 20,9-24,8 мкмоль/л при уровне эндотелина в пределах 0,7-3,9 пкг/мл. У всех этих беременных развился гестоз легкой степени.

Для 23 пациенток с физиологическим течением беременности были характерны более низкие показатели NOx и эндотелина в сыворотке крови и варьировали в пределах: NOx - 17,5-20,8 мкмоль/л, а эндотелина - 0,4-0,69 пкг/мл (3 группа).

Результаты исследования, приведенные в таблице, показали, что имеется статистически достоверное различие в уровне NOx и ЭТ-1 в сыворотке крови между тремя группами обследованных беременных женщин. Причем эти показатели находятся в неперекрещивающихся диагностических интервалах. Точность способа 98,7%.

Содержание метаболитов оксида азота и эндотелина-1 в сыворотке крови

Показатели 1 группа (средняя ст. тяжести гестоза) 2 группа (легкая ст. тяжести гестоза) 3 группа (физиолог. бер-ть) 
NOx (мкмоль/л) 24,9-49,6 20,9-24,8 17,5-20,8 
ЭТ-1 (пкг/мл) 4,0-8,3 0,7-3,9 0,4-0,69 


Таким образом, заявляемый способ является по сравнению с известными более информативным и обладает рядом преимуществ:

- обеспечивает оценку различной степени (тяжести) осложнения гестоза с высокой точностью;

- специфичен;

- обеспечивает объективный дифференцированный подход к терапии;

- прост в исполнении;

- не имеет противопоказаний.

Способ апробирован на значительном по объему материале и может широко использоваться в отделениях патологии беременных.




ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ оценки степени тяжести гестоза путем исследования крови беременной с 5 недель беременности, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют биохимические соединения эндотелии-1 (ЭТ-1) и метаболиты оксида азота (нитриты и нитраты - NOx) и при величине NOx от 20,9 до 24,8 мкмоль/л, а ЭТ-1 от 0,7 до 3,9 пкг/мл оценивают развитие гестоза легкой степени, а при величине NOx от 24,8 до 49,6 мкмоль/л, а ЭТ-1 от 4,0 до 8,3 пкг/мл диагностируют гестоз средней тяжести.