СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕРТИЛЬНОСТИ МУЖЧИН

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕРТИЛЬНОСТИ МУЖЧИН


RU (11) 2052202 (13) C1

(51) 6 G01N33/53 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 05.10.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1996.01.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 5009816/14 
(22) Дата подачи заявки: 1991.11.20 
(45) Опубликовано: 1996.01.10 
(56) Аналоги изобретения: Авторское свидетельство СССР N 1389758, кл. A 61B 10/00, 1988. 
(71) Имя заявителя: Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства 
(72) Имя изобретателя: Посисеева Л.В.; Татаринов Ю.С.; Пчелкина З.М.; Олефиренко Г.А.; Борзова Н.Ю. 
(73) Имя патентообладателя: Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕРТИЛЬНОСТИ МУЖЧИН 

Использование: в мещицине, а именно в гинекологии. Сущность изобретения: в спермальной жидкости исследуется содержание термостабильного альфа-1-гликопротеина и при уровне последнего выше 16 мкг/мл диагностируют сниженную фертильность спермы. Способ позволяет оценивать фертильность мужчин при всех видах нарушения репродуктивной функции. 1 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для определения фертильности спермы у мужчин с различными видами нарушений репродуктивной функции в супружеской паре (первичном и вторичном бесплодии, первичном невынашивании беременности у женщин ранних сроков и рождении детей с врожденными пороками развития неясной причины).

Известен способ определения фертильности мужчин путем исследования аминокислотного состава спермальной плазмы. По снижению уровня всех свободных аминокислот диагностируют бесплодие у мужчин.

Данный способ имеет ряд существенных недостатков: низкую точность (20,9% ), поскольку определяют патологию фертильности лишь при наличии сниженного количества или отсутствия сперматозоидов в сперме, при нормальной спермограмме у мужчин патологию способ не определяет, в связи с этим до производства метода необходимы предварительные исследования количества сперматозоидов в сперме; метод определяет патологию фертильности лишь в случаях бесплодия, при невынашивании беременности в паре исследования данным способом не проводят; кроме того, для производства метода необходима быстрая доставка спермы, материал хранению не подлежит, в связи с чем возможны ложные результаты; метод трудоемок, требует специального оборудования (денситометра, смонтированного на базе микрофотометра), дефицитных дорогостоящих реактивов, расчет уровня свободных аминокислот сложен, производится по калибровочным кривым.

Известен также способ определения фертильности мужчин по уровню хорионического гонадотропина (ХГ) в спермальной плазме радиоиммунологическим методом. По снижению уровня ХГ менее 3,5 мкг/л диагностируют бесплодие у мужчин.

Недостатки способа: имеет низкую точность (до 25,1%); выявляет патологию лишь при наличии сниженного количества или отсутствия сперматозоидов, при нормальной спермограмме у мужчин в бесплодном браке патологию способ не определяет, в связи с этим до производства метода необходимы предварительные исследования морфологического состава спермы; кроме того, данный способ не определяет фертильность спермы при невынашивании беременности в супружеской паре; для реализации способа необходима специально оснащенная радиоиммунологическая лаборатория, для данного способа необходимы импортные дорогостоящие радиоиммунологические наборы; метод трудоемок, реализация способа требует своей индивидуальной калибровки каждого набора, постановка метода от начала до получения конечного результата занимает двое суток.

Известен способ определения фертильности мужчин по характеристике морфологического состава спермы. При снижении числа сперматозоидов в сперме ниже 20х106 в 1 мл определяют сниженную фертильность мужчины.

Однако данный способ имеет ряд существенных недостатков: во-первых, применение способа ограничено одним видом нарушения репродукции бесплодием, при невынашивании беременности в паре данный способ не используется в оценке фертильности мужчины, диагностическая ценность данного способа составляет 25,1% низкая точность способа связана с тем, что он дает только количественную характеристику и не определяет функциональную неполноценность спермы.

Кроме того, исследование длительно по времени, окончательное заключение о морфологическом составе спермы может даваться лишь после трехкратного исследования эякулята, полученного путем прерванного полового сношения или мастурбации с длительностью полового воздержания в 5-6 дней, т.о. на все исследование затрачивается 10-12 дней.

Возможны ложные результаты, связанные с особенностями сбора и доставки спермы. Необходима быстрая транспортировка в определенных температурных параметрах. Сперму транспортируют при температуре, близкой человеческому телу, при этом промежуток времени от момента эякуляции до начала анализа не должен превышать 60 мин. Сперма хранению не подлежит. В связи со сложностью соблюдения необходимых условий сбора и доставки спермы указанный способ мало приемлем для обследования мужчин, живущих в незарегистрированных браках.

Число исследований спермограмм в день одним лаборантом ограничено до 10-15.

Наиболее близким по своей технической сущности и достигаемому результату является способ определения фертильности мужчин по содержанию в сперме плацентарного альфа2-микроглобудина (ПАМГ-2), при снижении уровня которого до 16 мкг/мл и ниже диагностируют сниженную фертильность мужчин.

Однако данный способ имеет существенные недостатки: во-первых, применение способа охватывает не все виды нарушений репродукции в браке и при вторичном бесплодии способ не используется, во-вторых, способ экономически не может быть дешевым, поскольку для приготовления специфических тест-систем против ПАМГ-2 используется дорогостоящее биологическое сырье абортная женская кровь.

Целью изобретения является расширение области применения способа определения фертильности мужчины.

Поставленная цель достигается тем, что определение фертильности мужчины осуществляют путем исследования в сперме иммунохимического параметра с последующим диагностированием пониженной фертильности при отклонении указанного параметра от нормы, в качестве такого параметра используют содержание термостабильного альфа-1- гликопротеина (ТАГ) и при уровне последнего в спермальной жидкости выше 16 мкг/мл диагностируют сниженную фертильность спермы.

Способ осуществляется следующим образом.

Собранную при физиологическом половом акте в мужской презерватив сперму хранят до проведения исследования в обычной морозильной камере при температуре ниже 0оС. При проведении анализа сперму размораживают при комнатной температуре. 5 капель спермальной жидкости последовательно разводят дистиллированной водой в лунках полиэтиленовой матрицы соответственно 1:1, 1:2, 1:4, 1: 8, 1:16, 1:32, 1:64. Реакцию проводят на обезжиренных предметных стеклах, залитых расплавленным 1%-ным раствором агара типа "Дифко" с 2%-ным раствором поваренной соли в количестве 5 мл. При застывании агара в нем пробивают лунки специальным стандартным штампом "семерка". Агар из лунок удаляют тонкой иглой. В центральную лунку с помощью пастеровской пипетки заливают антисыворотку против ТАГ, в две противолежащие раствор стандартного антигена, а в оставшиеся четыре исследуемую спермальную жидкость в разных разведениях. Стекла помещают в чашки Петри с влажной средой. Иммунопроявление длится 18-24 ч. Результаты читаются на следующий день в проходящем свете, учитывая последний подгиб линии преципитации возле лунки с соответствующим разведением исследуемой спермы. Это разведение спермальной жидкости умножают на чувствительность метода 4 мкг/мл. Таким образом, получают полуколичественную оценку результата. Полученный уровень ТАГ сравнивается с нормативным показателем этого белка у здоровых молодых мужчин, имеющих детей.

При значении ТАГ выше 16 мкг/л определяют сниженную фертильность спермы. При уровне ТАГ от 4 до 16 мкг/л диагностируют нормальную фертильность спермы.

Новизна изобретения заключается в том, что впервые предлагается способ определения фертильности спермы у мужчин по уровню ТАГ в спермальной жидкости. В известных способах определения фертильности мужчин содержание ТАГ не использовалось в качестве параметра, по изменению которого судили бы о фертильности спермы при бесплодии и невынашивании беременности. Содержание ТАГ в спермальной жидкости как параметр, позволяющий определять уровень фертильности спермы, существенно отличается от таковых в известных способах диагностики тем, что он выявляет патологию в спермальной жидкости не только при патологическом, но и при нормальном содержании в ней сперматозоидов, в связи с чем позволяет судить о фертильных свойствах спермы в парах с разным характером нарушений репродуктивной функции, в т.ч. первичном и вторичном бесплодии, невынашивании беременности, рождением детей с пороками развития.

Впервые ТАГ был идентифицирован в 1982 г при изучении антигенного состава семенной плазмы. Новый белок при нагревании в течение 1 ч при 100оС не менял иммунологических и физико-химических свойств. ТАГ в иммунодиффузионном анализе определялся у женщин только в слюне и ткани околоушной железы, а у мужчин еще в ткани семенника и сперме. В других органах, тканях и биологических жидкостях белок не обнаруживался. Ранее определение ТАГ для оценки фертильности мужчин не использовался.

Существо изобретения поясняется следующими примерами.

П р и м е р 1. Супружеская пара К. с первичным бесплодием в течение 6 лет. Жене 28 лет, здорова: менструальный цикл двухфазный, полноценный (по данным гормонального обследования и содержания ПАМГ-2 в менструальной крови), трубы проходимы, шеечный фактор бесплодия исключен. Мужу 30 лет, здоров. При обследовании его способом-прототипом патологии в содержании ПАМГ-2 в сперме не установлено (32 мкг/мл), спермограмма в пределах физиологической нормы. При обследовании мужа предложенным способом обнаружено патологическое содержание ТАГ в спермальной жидкости 64 мкг/мл. Сделано заключение о сниженной фертильности спермы, начато лечение мужа.

П р и м е р 2. Супружеская пара Т. с первичным бесплодием в течение 11 лет. Жене 29 лет. Здорова. Пpи обследовании мужа обнаружена азооспермия и повышение уровня ТАГ в спермальной жидкости до 512 мкг/мл. Т.о. в данном случае имеет место патологическое содержание ТАГ в морфологически измененной сперме. При этом определение фертильности спермы способом-прототипом патологии не выявило, содержание ПАМГ-2 в спермальной жидкости 64 мкг/мл. Рекомендована искусственная инсеминация жены спермой донора.

П р и м е р 3. Супружеская пара Р. первичное бесплодие в течение 7 лет. При обследовании общепринятыми методами исследования причина бесплодия не установлена. Жена здорова. Мужу 30 лет, здоров. Спермограмма без патологии, ПАМГ-2 в спермальной жидкости 64 мкг/мл, что соответствует нормативным значениям. При обследовании заявляемым способом обнаружено увеличенное содержание ТАГ в спермальной жидкости до 64 мкг/мл, на основании чего определено нарушение фертильности спермы, начато лечение мужа.

П р и м е р 4. Супружеская пара Ж. Муж и жена здоровы. У жены на 1-ом году супружеской жизни наступила беременность, закончившаяся самопроизвольным выкидышем в сроке 10 нед. Вторая беременность через год также закончилась самопроизвольным выкидышем в 8 нед. Причина невынашивания не установлена. При обследовании мужа способом-прототипом патологии фертильности спермы не выявлено (ПАМГ-2 в спермальной жидкости 32 мкг/мл, спермограмма нормальная). При обследовании заявляемым способом обнаружено повышение ТАГ спермальной жидкости до 128 мкг/мл. Сделано заключение, что причиной нарушения репродукции в паре является нарушение фертильности спермы мужа.

П р и м е р 5. Супружеская пара М. с вторичным бесплодием в течение 4 лет. Жене 30 лет, в анамнезе самопроизвольный выкидыш раннего срока. Мужу 30 лет, во втором браке. В первом браке в течение 2 лет детей также не было. Патологии в морфологическом составе спермы не обнаружено (спермограмма в пределах нормы). Содержание ТАГ в сперме 64 мкг/мл, на основании чего сделан вывод о нарушении ее фертильности. Мужу назначено лечение.

Данным способом была проведена оценка фертильности у 131 молодого мужчины, в том числе у 20 с нормальной репродуктивной функцией в супружеской паре, у 60 с первичным бесплодием, у 30 с вторичным бесплодием и у 21 зачатая от которых заканчивались спонтанными абортами у женщин неясной этиологии.

Способом-прототипом обследованы 67 мужчин с нормальной репродукцией в паре, 194 с первичным бесплодием, 96 вторичным бесплодием, 168 в парах с первичным невынашиванием женой беременности.

Все мужчины в супружеских парах с нарушением репродуктивной функции были бездетными.

У мужчин, имеющих здоровых детей (контрольная группа), показатели ТАГ в спермальной жидкости колебались от 4 до 24 мкг/мл. Наиболее часто встречались показатели ТАГ от 4 до 16 мкг/мл у 15 из 20 мужчин (75%), которые и приняты в качестве нормативных. Уровень ТАГ выше 16 мкг/мл (24 мкг/мл) встречался только у 5 мужчин (25%).

Таким образом, точность заявляемого способа в отношении нормальной фертильности мужчин составляет 75% Способом-прототипом подтверждена нормальная фертильность у 76,1% мужчин контрольной группы. Разница в точности способов при нормальной фертильности мужчин отсутствует (р > 0,05).

У мужчин в бездетных браках показатели ТАГ в сперме колебались от 4 до 128 мкг/мл, причем у большинства из них (76 из 111 68,5%) они были выше 16 мкг/мл. В отдельных группах мужчин с первичным бесплодием, вторичным бесплодием и первичным невынашиванием женой беременности уровень ТАГ выше 16 мкг/мл встретился соответственно в 65% 70% и 76,2%

По способу-прототипу уровень ПАМГ-2, определяющий патологию спермы, равный 16 мкг/мл и ниже, имеет место у 244 мужчин из 458 (53,3%) с нарушением репродуктивной функции в супружеской паре, из них у 104 мужчин (53,6%) в случаях первичного бесплодия, 29 (30,2%) при вторичном бесплодии и у 111 (66,1%) мужчин, зачатия от которых заканчивались самопроизвольными выкидышами у женщин.

Сравнительная оценка диагностическая точности заявляемого способа и способа-прототипа при определении патологии фертильности мужчины показала более высокую точность заявляемого способа в группе мужчин со вторичным бесплодием (см. таблицу).

Использование предлагаемого способа определения фертильности мужчин обеспечивает по сравнению с прототипом следующие преимущества.

1. Имеет более широкую область применения. Более точно оценивает фертильность спермы при вторичном бесплодии. Диагностическая точность в определении фертильности спермы при вторичном бесплодии превышает таковую способа-прототипа на 39,8%

2. Более экономичен, поскольку материалом для приготовления тест-системы против ТАГ служит более дешевое и легче получаемое сырье слюна. В способе-прототипе таким сырьем служит кровь из полости матки, получаемая при медабортах.

3. По заявляемому способу испытуемая сперма может быть подвергнута кипячению, что обеспечивает ее сохранность при необходимости пересылки на дальние расстояния. При кипячении ТАГ в сперме не разрушается, его количество не меняется. В способе-прототипе исследуемый ПАМГ-2 в сперме при кипячении разрушается и сохраняется только при замораживании свежего эякулята, в связи с чем пересылка анализов бывает невозможна, что ограничивает применение способа.

Таким образом, заявляемый способ определения фертильности мужчин обеспечивает расширение области его применения при всех видах нарушений репродуктивной функции в супружеской паре (не только первичном бесплодии и невынашивании беременности, но и вторичном бесплодии), экономичен в средствах при внедрении.

Использование предлагаемого способа определения фертильности мужчин позволяет быстро и точно в условиях любой поликлиники женской консультации, консультации "Брак и семья" оценить фертильные свойства спермы, что помогает в выявлении причин бесплодия и невынашивания беременности в супружеской паре, способствует правильному лечению и тем самым повышению рождаемости. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕРТИЛЬНОСТИ МУЖЧИН путем исследования иммунохимического параметра в спермальной жидкости, отличающийся тем, что в сперме определяют термостабильный альфа-1-гликопротеин, сравнивают с нормой и при повышении его концентрации выше 16 мкг/мл определяют сниженную фертильность спермы.