СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПОВТОРНОГО РАЗВИТИЯ ТЯЖЕЛЫХ ФОРМ ГЕСТОЗА

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПОВТОРНОГО РАЗВИТИЯ ТЯЖЕЛЫХ ФОРМ ГЕСТОЗА


RU (11) 2239839 (13) C1

(51) 7 G01N33/533 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 09.07.2007 - прекратил действие, но может быть восстановлен 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2004.11.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 2003107614/15 
(22) Дата подачи заявки: 2003.03.21 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2003.03.21 
(45) Опубликовано: 2004.11.10 
(56) Аналоги изобретения: RU 2135999 C1, 27.08.1999. НЕЦЕЕВСКАЯ М.А. Клинико-иммунологические критерии прогнозирования гестоза. Автореф. канд. дисс. - М., 2000. БЛИЗНЮК Е.А. Иммунологические аспекты в прогнозировании, диагностике и профилактике тяжелых форм гестозов на фоне хронического пиелонефрита. Автореф. канд. дисс. - Барнаул, 1998. 
(72) Имя изобретателя: Кулаков В.И. (RU); Серов В.Н. (RU); Шумаков В.И. (RU); Мурашко Л.Е. (RU); Мойсюк Я.Г. (RU); Ильинский И.М. (RU); Белецкая Л.В. (RU); Клименченко Н.И. (RU); Кравченко Н.Ф. (RU); Сергейко И.В. (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН (RU) 
(98) Адрес для переписки: 117997, Москва, ул. Акад. Опарина, 4, НЦ акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, директору 

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПОВТОРНОГО РАЗВИТИЯ ТЯЖЕЛЫХ ФОРМ ГЕСТОЗА
Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования гестоза у женщин, перенесших тяжелый гестоз. Сущность изобретения состоит в том, что проводят пункционную биопсию почки и при наличии в стенке сосудов и в капиллярах клубочков ее отложений иммуноглобулинов классов G, и/или М, и/или А средней или выраженной степенью флюоресценции прогнозируют повторное развитите тяжелой формы гестоза. Техническим результатом является повышение точности прогноза.




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству, и может найти применение в практике для прогнозирования гестоза у женщин, перенесших тяжелый гестоз, в том числе и с перинатальными потерями.

Известен способ прогнозирования развития гестоза на основании анамнестических и клинических факторов риска (Сидорова И.С. Поздний гестоз. Медицина, М., 1996 г., с.20). К их числу относятся такие, как экстрагенитальная патология (гипертоническая болезнь, вегетососудистая дистония, заболевания мочевыделительной системы, эндокринные нарушения), ожирение, ранний токсикоз, многоплодная беременность, гестоз, перенесенный в предыдущих беременностях и др. Однако, несмотря на многочисленные работы, посвященные этой проблеме, достоверность его крайне невелика.

Известен способ прогнозирования тяжелых форм гестоза у беременных в сроках свыше 16 недель гестации, заключающийся в том, что определяют уровень цитокининов - фактора некроза опухоли - альфа (ФНО-), -интерферона (ИФН-) и интерлейкина-6 (ИЛ-6) и при повышении ФНО- более чем в 2 раза, ИФН-у более чем в 20 раз и ИЛ-6 более чем в 3 раза по сравнению с исходными прогнозируют развитие тяжелой формы гестоза (Нецеевская М.А. Клинико-иммунологические критерии прогнозирования гестоза. Дис. канд. мед. н. М., 2000 г.).

Недостатком способа является его сравнительно невысокая точность. 

Задачей изобретения является повышение точности прогнозирования тяжелых форм гестоза.

Поставленная задача решается способом, заключающимся в том, что проводят пункционную биопсию почки и при наличии в стенке сосудов и в капиллярах клубочков ее отложений иммуноглобулинов классов G, и/или М, и/или А средней или выраженной степенью флюоресценции прогнозируют повторное развитие тяжелой формы гестоза.

Иммуно-морфологическое исследование проводится на материале пункционных биоптатов почек. Нефробиопсию проводят натощак, в положении лежа на животе на операционном столе с подложенным под живот валиком. После обработки операционного поля йодом с помощью тонкой иглы осуществляется инфильтрационная анестезия. Затем при задержке дыхания пациентки игла вводится до определенной отметки в ткань почки. С помощью специального аппарата пункционная игла "выстреливается" до определенной глубины почечной ткани. Нефробиопсию производят под непосредственным ультразвуковым контролем, что позволяет наблюдать за движением иглы на экране ультразвукового аппарата.

Полученные биоптаты последовательно помещают в нейтральный раствор формалина, 3,5% раствор глютаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4) и в среду Tissue-Tek (Miles). 

Почечные биоптаты, фиксированные в нейтральном растворе формалина, обезвоживают в спиртах возрастающей крепости и заливают в парафин. Гистологические срезы толщиной 4-5 мкм окрашивают гематоксилином и эозином по Ван-Гизону и Шифф-реактивом. Исследование гистологических препаратов проводят в световом микроскопе при увеличениях х100, х400 и x1000.

Образец биоптата почки, помещенный в раствор глютеральдегида на 0,1 М фосфатном буфере с последующей дофиксацией в 0,1% растворе осмиевой кислоты на том же буфере, используют для проведения ультраструктурного исследования почек с помощью трансмиссионного электронного микроскопа JEM-1000. Проводку и заливку материала, а также приготовление ультратонких срезов осуществляют по общепринятой методике.

Для проведения иммуноморфологического исследования используют почечный биоптат, фиксированный в среде Tissue-Tek (Miles), который замораживают в жидком азоте. В криостате делают серийные срезы толщиной 6 мкм, переносят их на предметные стекла и подсушивают препараты 30 мин при комнатной температуре. После этого на срезы на 2 мин наносят PBS, а затем обрабатывают меченным FITC антителами кролика к Ig G, М, А, С3 и фибрину. После инкубации срезов во влажной камере в течение 30 мин при комнатной температуре их трижды промывают в PBS и заключают в 60% нейтральный глицерин. Препараты просматривают на люминесцентном микроскопе Laborlux S (Leika) при увеличениях х400, х630, х1000.

Оценка степени фиксации иммуноглобулинов и комплемента в срезах осуществляется полуколичественным методом по градации интенсивности свечения и распространения в тканях: отрицательная реакция (-), слабая степень (1+), средняя степень (2+) и высокая степень (3+).

У 95% обследованных женщин, у которых при гистологическом исследовании нефробиопсий было обнаружено отложение вышеуказанных иммуноглобулинов, в дальнейшем наблюдали развитие тяжелых форм гестоза. Высокий процент выявления в почечных биоптатах иммуноглобулинов основных классов, по-видимому, является подтверждением одного из основных патогенетических звеньев развития гестоза, при котором циркулирующие иммунные комплексы откладываются в жизненно важных органах и оказывают на них повреждающее действие.

Таким образом, проведение иммуно-морфологического обследования почечных биоптатов у женщин во время беременности позволяет определить дальнейшую тактику ее ведения. У женщин группы риска с целью профилактики развития гестоза рекомендуется проведение метаболической терапии, иммуноцитотерапии аллогенными лимфоцитами мужа, иммуноглобулинотерапию и др.

Своевременно проведенная патогенетически обоснованная профилактика и терапия позволяют снизить частоту возникновения тяжелых форм гестоза и его осложнений.

Способ по изобретению иллюстрируется нижеследующими примерами.

Пример 1

Больная Е., 34 г. В анамнезе 1-я беременность осложнилась тяжелым гестозом и антенатальной гибелью плода. Наследственность не отягощена. Экстрагенитальной патологии не выявлено. Гинекологических заболеваний нет. Менструальная функция без особенностей. Беременность протекала с ранним токсикозом средней степени, угрозой прерывания на ранних сроках. С 24 недель беременности развился гестоз, характеризующийся артериальной гипертензией на уровне 140/90-180/110 мм рт. ст., протеинурией до 3 г/л, выраженными отеками. По данным функциональных методов исследования выявлена плацентарная недостаточность, гипотрофия плода 1-2 степ., внутриутробная гипоксия плода. Проводилась комплексная терапия гестоза с небольшим эффектом. Беременность удалось пролонгировать до 30 недель. Однако на фоне выраженного снижения фето-плацентарного и маточно-плацентарного кровотока произошла антенатальная гибель плода. Произошли самопроизвольные роды на 31-й неделе беременности мертвым гипотрофичным плодом (масса 928 г, рост 39 см) под эпидуральной анестезией на фоне управляемой гипотонии. В послеродовом периоде в течение 2 недель сохранялась артериальная гипертензия с уровнем артериального давления 140/90-150/100 мм рт. ст. Через 1 год после 1-х родов наступила повторная беременность, на ранних сроках которой (6-7 недель) произведена пункционная биопсия почки. При иммуно-морфологическом исследовании прямым методом иммунофлюоресценции выявлены мелкогранулярные отложения иммуноглобулина М в стенках капилляров клубочков средней степени (2+), что позволило сделать заключение о риске развития тяжелой формы гестоза. Во время беременности проводились курсы иммунотерапии аллогенными лимфоцитами мужа, иммуноглобулинотерапия, метаболическая терапия. В 30 недель беременности появились умеренные отеки, протеинурия. С 35 недель - артериальная гипертензия (130/80-140/90 мм рт. ст.). Лечение гестоза с положительным эффектом. В 38 недель произошли самопроизвольные роды. Родилась живая доношеная девочка массой 2980, рост 48 см и оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов.

Пример 2

Больная Н., 26 лет. В анамнезе 1-я беременность осложнилась развитием тяжелого гестоза. Наследственность: у мамы гипертоническая болезнь. Перенесенные заболевания: острый пиелонефрит в возрасте 15 лет. Гинекологический анамнез: хр. сальпингоофорит. Менструальная функция без особенностей. 1-я беременность наступила самопроизвольно. Протекала с легким токсикозом на ранних сроках. В 20 недель развился гестационный пиелонефрит, по поводу которого проводилась антибактериальная терапия с положительным эффектом. С 29 недель беременности развился гестоз, сопровождающийся артериальной гипертензией, отеками, протеинурией. Несмотря на проводимую терапию, в связи с прогрессированием гестоза (артериальное давление 180/110-190/120 мм рт. ст.) в 30 недель беременности произведена операция кесарева сечения. Родился живой недоношенный мальчик массой 1140 г, рост 39 см с тяжелой асфиксией. В течение 4 месяцев после родов сохранялась артериальная гипертензия (130/90-50/100 мм рт. ст.).

Через 1 год после родов наступила повторная беременность, при которой на сроке 5-6 недель произведена пункционная биопсия почки. При проведении прямого метода иммунофлюоресценции выявлена линейная фиксация иммуноглобулина G в стенке капилляров клубочков сильной степени (3+). В дальнейшем наблюдалась по месту жительства.

При повторном обращении в Центр на сроке 26 недель при обследовании выявлен гестоз. Артериальное давление колебалось в пределах 130/90-140/90 мм рт. ст. Наблюдались отеки, умеренная протеинурия. При допплерометрии выявлено снижение фетоплацентарного кровотока. Проводилась комплексная терапия гестоза, включающая иммуноглобулинотерапию, иммуноцитотерапию аллогенными лимфоцитами мужа. В 34 недели беременности в связи с прогрессированием гестоза и ухудшением состояния плода произведена операция кесарева сечения. Родился живой недоношенный мальчик массой 2070 г, рост 43 см с асфиксией средней степени.

Предлагаемый способ иммуно-морфологического исследования почечной ткани по результатам пункционных нефробиопсий наиболее показан женщинам, перенесшим тяжелый гестоз, в том числе с перинатальными потерями. Он включает в себя гистологическое и иммуноморфологическое исследование почечных биоптатов. Нефробиопсия выполняется под ультразвуковым контролем. Полученные препараты после соответствующей обработки исследуются в световом и электронном микроскопах.




ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ прогнозирования повторного развития тяжелых форм гестоза, включающий определение иммунологических показателей, отличающийся тем, что проводят пункционную биопсию почки и при наличии в стенке сосудов и в капиллярах клубочков ее отложений иммуноглобулинов классов G, и/или М, и/или А средней или выраженной степенью флюоресценции прогнозируют повторное развитие тяжелой формы гестоза.