ИЗОБРЕТЕНИЕ
Патент Российской Федерации RU2235331

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АТРОФИЧЕСКОГО КОЛЬПИТА

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АТРОФИЧЕСКОГО КОЛЬПИТА

Имя изобретателя:  Микашинович З.И. (RU); Саркисян О.Г. (RU); Гурнак Е.Е. (RU) 
Имя патентообладателя: Микашинович Зоя Ивановна (RU); Саркисян Олег Грачикович (RU); Гурнак Елена Евгеньевна (RU) 
Адрес для переписки: 344022, г.Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29. Ростовский государственный медицинский университет, патентный отдел 
Дата начала действия патента:  2002.10.22

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может найти применение в клинической практике для своевременного выявления атрофического кольпита. Для этого у больной производят исследование биологического материала, в качестве которого используют кровь, в эритроцитах которой определяют активность фосфорилазы и активность фосфогексоизомеразы. При снижении активности фосфорилазы ниже 110 мг/г Hb (гемоглобина) и снижении активности фосфогексоизомеразы ниже 0,17 мкМ/г Hb диагностируют раннюю стадию атрофического кольпита. Изобретение обеспечивает упрощение способа и повышение точности ранней диагностики атрофического кольпита.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может найти применение в клинической практике для своевременного выявления атрофического кольпита.

Атрофический кольпит (атрофия слизистой влагалища) - наиболее распространенный вид гинекологический патологии у пациенток в возрасте 55-60 лет (Балан В.Е., Вихляева Е.М., Зайдиева Я.З. и др. Менопаузальный синдром: Клиника. Диагностика. Профилактика и заместительная гормональная терапия. М.: 1996. - с. 22).

Атрофический кольпит остается одной из центральных проблем врачей-гинекологов. Повышенный интерес к этой проблеме объясняется тем, что атрофический процесс во влагалище существенно снижает качество жизни женщин переходного возраста, профессионально и творчески активных, поэтому ранняя диагностика процесса является актуальной и сложной задачей современной медицины (Балан В.Е., Сметник В.П. Урогенитальные расстройства в климактерии /Клиническая лекция/, М. - 1998., - С. 4).

Очень важно своевременно выявлять эту патологию, так как в запущенной стадии процесс трудно поддается лечению и возможны тяжелые последствия этого заболевания, приводящие к возникновению атрофии ткани, что сопровождается сильным зудом в области наружных половых органов и влагалища, способствующим нарушению психики. Учитывая это, большое значение имеет возможность своевременного выявления признаков атрофического кольпита в ранние сроки.

В настоящее время редко удается проследить начало клинического течения атрофического кольпита в связи с наличием у пациентки жалоб, характерных для других гинекологических заболеваний.

Проведенными исследованиями по научно-медицинской и патентной литературе найдены различные способы диагностики атрофического кольпита.

Известен способ диагностики атрофического кольпита на основании сбора анамнеза: жалоб больной на сухость во влагалище, затруднения при половой жизни, иногда кровянистые выделения. (Балан В.Е., Вихляева Е.М. и др. Менопаузальный синдром. М.: 1996. - с. 24; Балан В.Е., Сметник В.П. Урогенитальные расстройства в климактерии, /Клиническая лекция/, М., - 1998. - с. 4).

Другим способом диагностики атрофического кольпита является кольпоскопия - осмотр слизистой влагалища и влагалищной части шейки матки от 10- до 40-кратного увеличения при помощи кольпоскопа. (Балан В.Е., Вихляева Е.М. и др. Менопаузальный синдром. М.: 1996. - c. 24; Балан В.Е., Сметник В.П. Урогенитальные расстройства в климактерии /Клиническая лекция/, М.: 1998. - С. 4). При кольпоскопии диагностика атрофического кольпита осуществляется при наличии у обследуемой больной истончения слизистой влагалища, наличием кровоточивости, субэпителиальной сосудистой сети.

Недостатком указанных выше способов является то, что на начальных стадиях процесса атрофии слизистой влагалища не представляется возможным диагностировать данную патологию в связи с отсутствием у больной жалоб и видимых изменений слизистой влагалища.

На основании анализа научно-медицинской литературы был найден способ кольпоцитологии, наиболее близкий по технической сущности. В качестве прототипа выбран способ диагностики атрофического кольпита при помощи кольпоцитологии (Балан В.Е., Вихляева Е.М. и др. Менопаузальный синдром. М.: 1996. - С. 25; Мандельштам А.Э. Семиотика и диагностика женских болезней. Л.: "Медицина." - 1976, - С. 316).

При этом способе диагностику атрофического кольпита осуществляют путем исследования биологического материала больной, в качестве которого используют клетки взятые при помощи мазка из влагалища.

После взятия мазка определяют кариопикнотический индекс (КПИ), то есть процентное соотношение зрелых поверхностных клеток, содержащих пикнотические ядра, к клеткам, имеющим везикулярные ядра, диаметром от 6 мкм, который в норме составляет 30-35%. При снижении КПИ до 15-20% диагностируют атрофический кольпит (Балан В.Е., Вихляева Е.М. и др. Менопаузальный синдром. М.: 1996. - С. 25; Мандельштам А.Э. Семиотика и диагностика женских болезней. Л.: "Медицина". -1976. - С. 316).

Однако применение данного способа также не всегда позволяет осуществить раннюю диагностику атрофического кольпита, поскольку на ранней стадии заболевания иногда КПИ может не снижаться, к тому же данный способ не всегда достоверен, так как снижение КПИ может происходить и при других гинекологических заболеваниях, в частности передающихся половьм путем (трихомонадный колышт, хламидии). Немаловажным является факт отрицательного психологического воздействия на женщин манипуляций, связанных с проведением забора биологического материала.

Целью настоящего изобретения является упрощение и повышение точности ранней диагностики атрофического кольпита.

Эта цель достигается тем, что у больной производят исследование крови, в эритроцитах которой определяют активность фосфорилазы и активность фосфогексоизомеразы. Установление, что у здоровых женщин активность фосфорилазы - 110 мг/г Hb, a активность фосфогексоизомеразы - 0,17 мкМ/г Hb. При снижении активности фосфорилазы ниже 110 мг/г гемоглобина (Hb) и снижение активности фосфогексоизомеразы ниже 0,17 мкМ/г Hb диагностируют начальную стадию атрофического кольпита.

Способ осуществляют следующим образом: у больной берут из вены 3 мл крови. Эритроциты получают из венозной крови, стабилизированной гепарином - из расчета 10 ед. гепарина (аптечная упаковка 5 флаконов по 5 мл, в 1 мл 5000 ЕД) на 1 мл крови, с последующим центрифугированием на центрифуге ЦЛК-1 (3000 об/мин в течение 15 мин).

Поскольку активность ферментов эритроцитов пересчитывают на содержание в них гемоглобина, то предварительно в гемолизате определяют содержание гемоглобина (Нb). Гемолизат готовят с дистиллированной водой (разведение в 20 раз; т.е. к 1,9 мл дистиллированной воды добавляют 0,1 мл эритроцитов).

Содержание гемоглобина определяют по методу, описанному И.С. Лугановой, М.Н. Блиновым (Лабораторное дело. -1975. - №7. - С. 652-654).

В опытную пробирку вносят 0,2 мл гемолизата, затем добавляют 4,8 мл NH4OH, 1 мл концентрированного NH4OH доводят до 250 мл дистиллированной водой. В контрольную пробирку вносят 0,2 мл Н2О и 4,8 мл NН4OН.

Колориметрируют на спектрофотометре марки СФ-46 при длине волны l =540 нм. Содержание Нb выражают в г/л. Коэффициент пересчета - 0,0282 концентрированного Нb г/мл. Следовательно, коцентрация Нb равна полученной экстинции, умноженной на коэффициент пересчета (Еx 0,0282).

Активность фосфорилазы в эритроцитах определяют по методу, описанному Фердманом Д.Л. и Сониным Е.Ф. (Практикум по биологической химии. М: 1957. - С. 184-185). Метод основан на определении уменьшения количества фосфорной кислоты в смеси под влиянием фосфорилазы.

Для этого в опытную пробирку вносят 1 мл фосфорной смеси к 10 мл физ. раствора добавляют 3 мл фосфатного буфера рН 7,4, приливают 0,4 мл 0,8% раствора MgSO4 x7Н2O, добавляют 0,5 мл 0,1 М раствора NaF, 0,5 мл 3% раствора крахмала, 0,2 мл гемолизата, разведенного в 20 раз.

В контрольную пробирку вносят также 1 мл фосфорной смеси, только вместо 0,5 мл 3% раствора крахмала добавляют 0,5 мл 2O и сразу приливают 2,5 мл 10% трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Обе пробирки ставят в термостат на 1 час при t=37 C. В опытной пробирке реакцию останавливают добавлением 2,5 мл 10% ТХУ. Содержимое обеих пробирок центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. Затем из каждой пробирки берут по 0,1 мл центрифугата, вносят в 4,9 мл Н2О и 0,5 мл 1% молибдата аммония, затем приливают 0,5 мл 1% аскорбиновой кислоты. Колориметрируют на СФ-46 при длине волны l =590 нм. Результаты выражают в мг/г Нb за час инкубации по калибровочному графику.

Активность фосфогексоизомеразы определяют по методу, описанному Езерским Р.Ф. в статье "Активность сывороточной фосфогексокиназы - новый клинический тест" (Лабораторное дело. -1960. - №4. - С. 15), основанному на измерении образовавшегося в ферментативной реакции фруктозофосфата и последующего его окрашивания в реакции Селиванова. По количеству фруктозофосфата судят об активности фосфогексоизомеразы.

Приготовление субстратной смеси

Предварительно 60,3 мг глюкозо-6-фосфата Na соль растворяют в 5 мл Н2О.

В стакан вносят 2,1 мл указанного выше раствора, приливают 6,2 мл веронал-ацететного буфера рН 7,4, затем добавляют 10 мл Н2О и 0,6-молярной НСl по каплям до рН 7,4. Потом доводят объем до 25 мл.

В центрифужные пробирки, контроль "до" и опыт "после": "до" - к 1,2 мл 20% ТХУ приливают 1 мл субстратной смеси; "после" - только субстратную смесь в объеме 1 мл. В обе пробирки разливают гемолизат по 0,2 мл. Пробы инкубируют 30 мин в термостате при 37 С. Реакцию останавливают в пробирке "после" 1,2 мл 20% ТХУ. Содержимое обеих пробирок "до " и "после" центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин. Центрифугат "до" и "после" по 1 мл разливают в пробирки. Добавляют в каждую пробирку 1 мл 1% резорцина на этаноле и 3 мл 10М NCl. Пробирки помещают на 10 мин в водяную баню (t=90 С). Охлаждают и центрифугируют. Колориметрируют на СФ-46 при l =540.

Результат определяют по калибровочному графику и выражают в мкМ/г Hb. При снижении a -активности фосфорилазы ниже 110 мг/г Hb и снижении a -активности фосфогексоизомеразы ниже 0,17 мкМ/г Hb диагностируют раннюю стадию атрофического кольпита.

Теоретической предпосылкой для разработки данного способа ранней диагностики атрофического кольпита явилась оценка результатов исследования, проводимого на базе женской консультации №1 г. Ростова-на-Дону. Было организовано 2 группы исследуемых.

Первую группу составили женщины (средний возраст 53 года), не имеющие объективных жалоб. У этой группы исследовался только КПИ. При исследовании величина КПИ находилась в пределах нормы.

У второй группы женщин (средний возраст 48 лет), не имеющих объективных жалоб, исследовались КПИ и ферменты эритроцитов фосфорилаза и фосфогексоизомераза. При сравнении КПИ пациенток первой и второй групп значения КПИ практически не отличались друг от друга. А активность ферментов у части женщин второй группы была снижена. На этом основании вторая группа была разделена на 2 подгруппы: 1 подгруппа - без отличий клинических данных, 2 подгруппа - со снижением активности ферментов фосфорилазы и фосфогексоизомеразы.

Анализ этих данных позволил сделать заключение, что снижение активности ферментов фосфорилазы (ниже 110 мг/г Hb) и фосфогексоизомеразы (ниже 0,17 мкМ/г Hb) может служить показателем для ранней диагностики атрофического кольпита. Дальнейшие наблюдения за пациентками 2 группы подтвердили наше предположение.

Клинический пример 1

Больная М. История болезни №325. 52 года. Обратилась в женскую консультацию №1 г. Ростова-на-Дону по поводу профилактического медицинского осмотра. По данным клинического осмотра объективных признаков атрофии не выявлено.

Больной проведено исследование ферментов крови согласно предлагаемому способу. Биохимические исследования крови показали следующие значения: активность фосфорилазы 76 (ниже 110) мг/г Hb; активность фосфогексоизомеразы 0,139 (ниже 0,17) мкМ/г Hb, на основании чего больной поставлен диагноз - ранняя стадия атрофического кольпита и назначена медикаментозная терапия. После проведенного лечения, применяемого при атрофическом кольпите, у больной была взята кровь для исследования активности ферментов согласно предлагаемому способу. Активность фосфорилазы была 110 мкМ/г Hb и активность фосфогексоизомеразы 0,17 мкМ/г Нb, что соответствовало нормальным показателям здоровых женщин.

Клинический пример 2

Больная О. История болезни №267. 49 лет. Обратилась в женскую консультацию №1 г. Ростова-на-Дону по поводу профилактического медицинского обследования. Клинический осмотр объективные признаки атрофии не выявил. Согласно предлагаемому способу биохимические исследования крови показали следующие значения: активность фосфорилазы 64 (ниже 110) мг/г Hb; активность фосфогексоизомеразы 0,11 (ниже 0,17) мкМ/г Hb, на основании чего поставлен диагноз - ранняя стадия атрофического кольпита. Однако, по ряду обстоятельств, лечение не было продолжено.

Через 4 месяца пациентка вновь обратилась в женскую консультацию по поводу жалоб на зуд и жжение в области влагалища.

Больной проведено повторное исследование крови, показавшее, что значения, при которых активность фосфорилазы была 70, т.е. ниже 110 мкМ/г Нb; активность фосфогексоизомеразы 0,1, т.е. ниже 0,17 мкМ/г Hb. На основании чего был подтвержден поставленный ранее диагноз - атрофический кольпит, и больной проведен курс лечения.

По предлагаемому способу диагноз ранней стадии атрофического кольпита был поставлен 19 женщинам.

Предлагаемый способ, по сравнению с прототипом, является более простым и позволяет с большой достоверностью осуществлять раннюю диагностику атрофического кольпита у женщин и принять своевременные меры для последующего медикаментозного лечения. 

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ диагностики атрофического кольпита у женщин путем исследования биологического материала, отличающийся тем, что в качестве биологического материала берут кровь, в эритроцитах которой определяют активность фосфорилазы и активность фосфогексоизомеразы, и при снижении активности фосфорилазы ниже 110 мг/г Hb, а активности фосфогексоизомеразы ниже 0,17 мкМ/г Hb диагностируют раннюю стадию атрофического кольпита.

Версия для печати
Дата публикации 24.05.2007гг


вверх