СРЕДСТВО ДЛЯ ВНУТРИУТРОБНОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ПНЕВМОПАТИЙ НОВОРОЖДЕННЫХ, ВЫЗВАННЫХ ВНУТРИУТРОБНОЙ ГИПОКСИЕЙ И ИНФЕКЦИЕЙ

СРЕДСТВО ДЛЯ ВНУТРИУТРОБНОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ПНЕВМОПАТИЙ НОВОРОЖДЕННЫХ, ВЫЗВАННЫХ ВНУТРИУТРОБНОЙ ГИПОКСИЕЙ И ИНФЕКЦИЕЙ

RU (11) 2056842 (13) C1

(51) 6 A61K31/19 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 09.07.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1996.03.27 
(21) Регистрационный номер заявки: 5067941/14 
(22) Дата подачи заявки: 1992.06.30 
(45) Опубликовано: 1996.03.27 
(56) Аналоги изобретения: Дженкинс. Химия органических лекарственных препаратов, М., 29, с.236. 
(71) Имя заявителя: Московский научно-исследовательский институт педиатрии и детской хирургии 
(72) Имя изобретателя: Кондрашова М.Н.; Ананенко А.А.; Федюшкина Н.А.; Клейменова Н.В.; Пасынков И.В.; Видута О.Д. 
(73) Имя патентообладателя: Московский научно-исследовательский институт педиатрии и детской хирургии 

(54) СРЕДСТВО ДЛЯ ВНУТРИУТРОБНОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ПНЕВМОПАТИЙ НОВОРОЖДЕННЫХ, ВЫЗВАННЫХ ВНУТРИУТРОБНОЙ ГИПОКСИЕЙ И ИНФЕКЦИЕЙ 

Изобретение относится к медицине и касается средства для внутриутробной профилактики пневмопатий новорожденных, вызванных внутриутробной гипоксией и инфекцией. Изобретение позволяет повысить выживаемость новорожденных животных за счет применения янтарной кислоты. 8 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к экспериментальной медицине.

Патология перинатального периода новорожденных, в патогенезе которой ведущее значение принадлежит внутриутробной гипоксии и инфицированию плода, является одной из актуальных проблем педиатрии (Сотникова К.А. и соавт. 1980, Дементьева Г.М. и соавт. 1991, Victоr Y H YU, 1990).

Нередко внутриутробная гипоксия сопровождается или осложняется развитием инфекционных процессов. Процент инфицирования новорожденных вирусом простого герпеса высок, однако его роль в развитии патологии перинатального периода остается недостаточно изученной. По данным ВОЗ (1985) вирус простого герпеса обнаружен в родовых путях женщин с преждевременными родами в 30% случаев.

Известно, что перинатальная гипоксия повышает частоту возникновения и тяжесть синдрома дыхательных расстройств (СДР), обусловленного незрелостью и нарушением метаболизма легочного сурфактанта (Жукова Т.П. и соавт. 1984). Определенную роль в этом процессе играет интенсификация перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Ананенко А.А. 1988).

В связи с этим поиск эффективного профилактического средства, предупреждающего возникновение пневмопатий и развитие СДР у новорожденных, является достаточно актуальной проблемой.

Для внутриутробной профилактики пневмопатий (СДР) у новорожденных применяются гормональные препараты (глюкокортикоиды) с целью индуцирования ферментных систем, участвующих в созревании системы легочного сурфактанта.

Оценка применения глюкокортикоидов неоднозначна. Отмечен положительный эффект (снижение смертности за счет уменьшения частоты СДР, бронхолегочной дисплазии, внутричерепных кровоизлияний) (M. Hollman (1977), Ph. Allard (1977), Охапкин М.Б. (1986), Dogle (1986), Morales (1986)).

Недостатком этих способов является нецелесообразность применения глюкокортикоидов, так как глюкокортикоидные рецепторы находятся не только в ткани легких, но и в почках, сердце, печени, мозге. Поэтому стероиды, связываясь с любой быстрорастущей тканью и воздействуя на любые быстроделящиеся клетки, снижают их численность в организме путем подавления синтеза ДНК, уменьшая общую массу тела, замедляя рост мозга и размеры головки плода. При этом происходит ускорение развития соединительной ткани, что приводит к преждевременному старению плаценты (L. Gluck (1984), S. Weiner и L. Weinstein (1987)).

Цель изобретения применение нетоксичного естественного метаболита янтарной кислоты, не обладающего в отличие от гормональных препаратов побочными эффектами с целью внутриутробной профилактики пневмопатий у новорожденных, вызванных внутриутробной гипоксией и вирусной инфекцией.

Исследования проводили на белых беспородных новорожденных крысятах, которые составили 3 группы:

1. Контрольная группа (интактные животные).

2. Группа животных с внутриутробной гипоксией и герпетической инфекцией: крысята от самок, инфицированных до наступления беременности вирусом простого герпеса 2 типа (ВПГ 2). Инфицирование самок осуществляли ВПГ 2 (штамм ВН) введением в подушечки обеих задних лапок (доза 1000 ТЦИД 50/0,1 мл), и находившихся последние 4 сут беременности в камерах с гипоксической смесью, содержащей 10% кислорода, что соответствует подъему на высоту 5,5-6 тыс.м.

3. Группа животных с внутриутробной гипоксией и герпетической инфекцией, получавших янтарную кислоту (крысята от самок, подвергнутых инфицированию и гипоксии, которым в последние 4 сут беременности вводили 2%-ный раствор янтарной кислоты per os в дозе 50 мг/кг массы тела 1 раз в сутки). Янтарная кислота была предоставлена Краснодарским политехническим институтом.

На 22 день беременности во время родовой деятельности самок подвергали декапитации и лапоротомии. Плоды и плаценты извлекались из полости матки.

Материалом для исследования служили плацента, также легкие и почки новорожденных крысят.

В работе использовали биохимические, морфологические и вирусологические методы исследования.

I. Биохимические методы исследования:

О состоянии сурфактантной системы легких судили по определению поверхностно-активных фосфолипидов (ПАФЛ), которое проводилось по Gluck et al (1972). Фракционирование ПАФЛ осуществлялось с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) на силикагеле фирмы "Merk" (ФРГ) с использованием системы Nichols. Количественное содержание фосфора индивидуальных фракций определялось методом Dittmer, Lester (1964) в модификации Vaskovsky, Kostetsky (1968). Для оценки состояния процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) определяли общие липиды гравиметрическим методом, первичные продукты ПОЛ диеновые конъюгаты (ДК) (Шилина и соавт. 1978), конечные продукты ПОЛ основания Шиффа (ШО) (Bidlack et al, 1973).

II. Морфологические методы исследования:

1. Световая микроскопия.

Кусочки тканей фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина и 5% -ном растворе бихромата калия, органы после фиксации помещали в парафин. Срезы, полученные с парафиновых блоков, окрашивали гематоксилином, эозином, пикрофуксином по ван Гизону, применяли Шик-реакцию на гликоген и нейтральные полисахариды с соответствующими контролями.

2. Метод полутонких срезов.

Кусочки тканей фиксировали в растворе глютаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4). При 600-кратном увеличении подсчитывали количество липидных включений в липофибробластах.

3. Электронная микроскопия.

Фиксацию органов проводили 2%-ным раствором глютаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,2-7,4) с постфиксацией 1%-ным раствором четырехокиси осмия. Ткань заключали в аралгит. Ультратонкие срезы толщиной 20-30 нм получали на ЛКБ-3, контрастировали уранил-ацетатом и цитратом свинца по Рейнольдсу.

III. Вирусологические методы исследования: с целью подтверждения инфицирования ВПГ 2 крыс и новорожденных крысят использован метод прямой иммунофлюоресценции для выявления герпетического антигена в отпечатках клеток плаценты, легких, почек и мазках крови по свечению ядра клетки и диффузному свечению цитоплазмы.

Материалы обработаны статистически. Достоверности различия одноименных показателей вычисляли по формулам параметрической вариационной статистики с использованием критерия Стъюдента.

Установлено, что сочетанное воздействие внутриутробной гипоксии и герпетической инфекции привело к гибели 27% новорожденных животных. Роды начинались на 7-12 ч раньше, чем у животных контрольной группы. Анализ биохимических и морфологических исследований свидетельствует о том, что внутриутробная гипоксия в сочетании с герпетической инфекцией приводит к выраженному снижению синтеза липидов, интенсификации процессов ПОЛ и грубым нарушениям в системе легочного сурфактанта. Содержание общих липидов в плаценте, легких и почках было снижено по сравнению с контролем в 2,1, 1,8 и 1,5 раза соответственно (табл.1). Об интенсификации процессов ПОЛ свидетельствовало резкое нарастание содержания ДК в плаценте в 4,9 раза, в легких и почках в 3,3 и 3,7 раза, содержание ШО увеличилось по сравнению с контролем в 1,7 раза в плаценте, в 2 раза в легких и почках (табл.2,3).

При сравнительном анализе распределения фракций ПАФЛ сурфактанта легких выявлена биохимическая незрелость системы сурфактанта у крысят с сочетанным воздействием гипоксии и герпетической инфекции. Наблюдалось достоверное снижение содержания основных поверхностно-активных фракций фосфатидилхолина (ФХ) и фосфатидилглицерола (ФГ) при нарастании фракции лизофосфатидилхолина (ЛФХ), что отражает значительное нарушение системы легочного сурфактанта у животных данной группы (табл.7).

Морфологические изменения в легких были также существенными. Клеточная деструкция выявлялась как в стромальных элементах, так и в альвеолярной выстилке. Количество липидов в липофибробластах, сниженное по сравнению с контролем на 68% подтверждает обеднение ткани легких липидами. В альвеолярных клетках II типа снижено содержание цитофосфолипосом. В просветах альвеол содержатся единичные альвеолярные макрофаги, не содержащие осмиофильных пластинчатых телец, в то же время в просветах альвеол имеются скопления свободных осмиофильных пластинчатых телец, что свидетельствует о нарушении утилизации отработанного сурфактанта. Выявлены гемодинамические нарушения (полнокровие капилляров, кровоизлияния в интерстиций и просветы воздухоносных путей). Все перечисленные признаки указывают на нарушение формирования и функционирования сурфактантно-альвеолярного комплекса.

Морфологическое исследование ткани почек показало наличие признаков нарушения кровообращения в сосудах клубочков, существенную инфильтрацию стромы почек мононуклеарными клетками, что свидетельствует о наличии инфекционно-воспалительного процесса. Методом электронной микроскопии выявлено присутствие вирусных частиц в ядрах подоцитов и субподоцитарном пространстве. Отмечается деструкция ядра и органелл клеток, которая вызвана локализацией ВПГ 2 в данном органе. Известно, что ВПГ 2 обладает тропизпом по отношению к органам моче-половой сферы. Данные электронной микроскопии позволяют расценить деструктивно-дистрофические процессы в органе, как признаки экссудативно-пролиферативного воспаления.

При использовании янтарной кислоты случаев гибели животных с внутриутробной гипоксией и герпетической инфекцией не наблюдалось, роды начинались в срок, как и у животных контрольной группы. Достоверно снизилось содержание герпетического антигена в органах самок и новорожденных животных. Наблюдалась положительная динамика биохимических и морфологических показателей. Содержание общих липидов возросло при применении янтарной кислоты в плаценте в 1,5 раза, в легких и почках в 1,4 и 1,3 раза соответственно. Достоверно снизилось содержание продуктов ПОЛ (табл.4,5,6).

Количественное содержание фракций ПАФЛ легких при применении янтарной кислоты у новорожденных с внутриутробной гипоксией и герпетической инфекцией нормализовалось (табл.3).

При морфологическом исследовании у новорожденных животных с внутриутробной гипоксией и герпетической инфекцией, получавших янтарную кислоту, в легких определяется нормальное количество липидов в липофибробластах. Альвеолярные клетки содержат количество цитофосфолипосом, близкое к контролю. В просветах альвеол присутствуют альвеолярные макрофаги с осмиофильными тельцами, свободных осмиофильных телец не содержится, что свидетельствует о правильно сформированном сурфактантно-альвеолярном комплексе. Гемодинамические нарушения отсутствуют. В почках новорожденных животных при световом и электронно-микроскопическом исследовании деструктивно-дистрофического процесса не обнаружено, признаков воспаления нет.

Положительная динамика биохимических и морфологических показателей свидетельствует о благоприятном профилактическом влиянии янтарной кислоты на потомство животных, перенесших сочетанное воздействие гипоксии и герпетической инфекции.

Применение янтарной кислоты повышает выживаемость новорожденных животных с внутриутробной гипоксией и герпетической инфекцией, улучшает биохимические (состав поверхностно-активных фосфолипидов легких и процессы перекисного окисления липидов) и морфологические (количество липидов в липофибробластах, цитофосфолипосом в альвеолоцитах II типа, стабилизация клеточных мембран) показатели, что служит экспериментальным обоснованием для клинических испытаний янтарной кислоты с целью профилактики синдрома дыхательных расстройств у новорожденных. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Применение янтарной кислоты в качестве средства для внутриутробной профилактики пневмопатий новорожденных, вызванных внутриутробной гипоксией и инфекцией.