СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ГЕСТОЗА

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ГЕСТОЗА

RU (11) 2249212 (13) C1

(51) 7 G01N33/48 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 09.07.2007 - прекратил действие, но может быть восстановлен 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(14) Дата публикации: 2005.03.27 
(21) Регистрационный номер заявки: 2003125628/15 
(22) Дата подачи заявки: 2003.08.19 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2003.08.19 
(45) Опубликовано: 2005.03.27 
(56) Аналоги изобретения: МЕДВЕДИНСКИЙ И.В. и др. Сб. научных трудов. Перинатальная анестезиология и интенсивная терапия матери, плода и новорожденного. Екатеринбург, 1999, с.25-32. RU 2135999 C1, 27.08.1999. RU 2143694 C1, 27.12.1999. RU 2191384 C2, 20.10.2002. RU 2190848 С2, 10.10.2002. 
(72) Имя изобретателя: Орлов А.В. (RU); Крукиер И.И. (RU); Друккер Н.А. (RU); Погорелова Т.Н. (RU); Авруцкая В.В. (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Ростовский НИИ акушерства и педиатрии МЗ РФ (RU) 
(98) Адрес для переписки: 344012, г.Ростов-на-Дону, ул. Мечникова, 43, РНИИАП, патентный отдел 

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ГЕСТОЗА
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и касается способа прогнозирования гестоза. Сущность изобретения заключается в том, что в ранние сроки (с 5 недель) в плазме крови беременной определяют уровень карбонильных производных белков и при величине, равной 51,7 ед. оптической плотности /г белка и выше прогнозируют развитие гестоза. Преимущество изобретения заключается в возможности доклинической диагностики.




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и найдет широкое применение для объективного прогнозирования развития гестоза.

Несмотря на несомненные успехи в лечении гестоза, он по-прежнему остается одним из наиболее часто встречающихся осложнений беременности. Патохимические и патофизиологические механизмы гестоза закладываются уже на начальных стадиях беременности и обусловлены они нарушением инвазии трофобласта и гестационной трансформации спиральных артерий матки с последующим повреждением функции эндотелия сосудов. Основная проблема при решении вопроса о наличии гестоза заключается в отсутствии критериев, с помощью которых прогнозируют его развитие на самых ранних сроках беременности. 

Анализ патентной и научно-медицинской литературы позволил установить, что для диагностики тяжелейшего осложнения беременности - гестоза, в настоящее время предложены тесты, относящиеся к физиологическим, морфологическим, иммунологическим и биохимическим методам исследования.

1. Физиологические тесты.

Так в работе А.Н.Стрижакова, О.Р.Баева, И.В.Игнатко (Прогнозирование развития гестоза и фетоплацентарной недостаточности. Российский Вестник акушера-гинеколога. T.1. №1. 2001, с.39-43) подчеркивается возможность прогнозирования гестоза при допплерометрических исследованиях в 20-21 нед., когда наблюдается повышение допплерометрических индексов сосудистой резистентности в системе маточных и пуповинных артерий. В спиральных артериях эти изменения отмечены в 16-19 недель. Известен способ диагностики позднего токсикоза беременности (авторское свидетельство № 1217349, 1986), согласно которому дифференциацию степени тяжести токсикоза определяют по степени наполнения малого круга кровообращения путем измерения величины амплитуды систолической волны реопульмонограмм в шести зонах легких. Известен способ доклинической стадии гестоза с хроническим приелонефритом (заявка №98111316, 2000), при котором методом ультразвуковой допплерометрии на основании увеличения С/Д отношения в артериях паренхимы почки в 17-21 неделю диагностируют доклиническую стадию гестоза.

2. Морфологические тесты.

Известен патент РФ № 2138805, 1999 г. - способ диагностики гестоза по оценке адренореактивности эритроцитов беременных женщин.

Известен патент РФ № 2143694, 1999 г. - способ диагностики гестоза по определению НСТ-положительных форм и индекса активации нейтрофилов. 

3. Иммунологические тесты.

Известны способы диагностики поздних гестозов:

- по авторскому свидетельству СССР № 1398832, 1988, сущность которого заключается в определении в крови количества сенсебилизированных к антигенам плаценты лимфоцитов и уровня кортизола в сроке 20 недель;

- по авторскому свидетельству СССР № 1683672, 1991, согласно которому определение титра гомореактантов и титра естественных антител к эритроцитам барана с 24 недель беременности позволяет прогнозировать развитие гестоза;

- по патенту РФ № 2120636, 1998 дает возможность во II-III триместрах путем определения иммунокомпетентных белков в сыворотке крови матери диагностировать поздний гестоз;

- по патенту РФ № 2135999, 1999 по определению в сыворотке крови в сроке 13-14 недель антифосфолипидных антител.

4. Биохимические тесты. 

Известны способы диагностики позднего гестоза беременности: 

- по авторскому свидетельству СССР № 572534, 1990 по определению уровней липидов и фосфолипидов в критические для беременности сроки, показатели которых повышаются при токсикозе беременности; 

- по авторскому свидетельству СССР № 1358936, 1987, в котором указывается, что проводя фотометрию безбелковой плазмы при длине волны 254 нм, и увеличении оптической плотности более чем на 13%, диагностируют токсикоз;

- по авторскому свидетельству CCCP № 1337778, 1987, согласно которому определяют в периферической крови время гемолиза эритроцитов, процент гибели клеток и уровень свободного гемоглобина плазмы, позволяющие диагностировать гестоз и его различные степени;

- по патенту РФ № 1612263, 1990, в котором определяют в сыворотке крови беременной активность супероксиддисмутазы (СОД) и диагностируют наличие гестоз;

- в патенте РФ № 2133037, 1999 предлагается определение в плазме крови активности катепсина G, что дает возможность диагностироовать гестоз;

- по патенту РФ № 2138817, 1999, определение слюно-спермального глобулина в слюне беременных женщин в период с 28 недельного срока, позволяет диагностировать поздний гестоз;

- по патенту РФ № 2190848, 2002, в котором указывается на периодическое исследование крови спектрально-флуоресцентным анализом экстракта копропорфиринов и протопорфиринов эритроцитов и при величине отношения их менее 10, диагностируют гестоз;

- по патенту РФ № 2021607, 1994. В данном изобретении в основе диагностики позднего гестоза лежит расчет интоксикационного индекса, составными показателями которого являются: содержание мочевины в сыворотке крови, концентрация молекул средней массы и содержание тромбоцитов. Сроки диагностики возможны с 27 недель беременности;

- по патенту РФ № 2040794, 1995 г. - определение резистентности эритроцитов к ряду гемолитиков. Сроки возможной диагностики с 23 недель беременности.

Основным недостатком вышеперечисленных методов является невозможность доклинической диагностики гестозов.

Прототипом данного изобретения избран “Способ диагностики гестоза, описанный в статье “Современный взгляд на концепцию развития полиорганной недостаточности при гестозе (И.В.Медвединский, И.Д.Юрченко, Л.Н.Пестряева и соавт.//Сб. научных трудов. Перинатальная анестезиология и интенсивная терапия матери, плода и новорожденного. Екатеринбург. - 1999. С.25-32). 

Сущность способа-прототипа состоит в том, что определение в крови повышенного уровня эндотелиоцитов, свидетельствующее о повреждении эндотелия сосудов, подтверждает наличие гестоза. 

Данный способ, как и предыдущие, обладает рядом несовершенств: 

1. Невозможно раннее доклиническое прогнозирование гестоза. 

2. Информативность способа достаточно высока лишь при нарастании тяжести гестоза.

Указанные недостатки устраняются в заявляемом изобретении.

Задача изобретения: разработка способа, позволяющего с высокой точностью в ранние сроки (на доклинической стадии) беременности прогнозировать развитие гестоза. 

Поставленная задача решается тем, что в ранние сроки (с 5 недель) в плазме крови беременной определяют уровень карбонильных производных белков и при величине, равной 51,7 ед/г и выше прогнозируют развитие гестоза.

Согласно наиболее распространной теории, гестоз формируется очень рано, еще во время плацентации, когда возникает генерализованное повреждение эндотелия децидуальной оболочки и ворсин хориона. Одной из важных причин повреждения эндотелия является модификация его белкового компонента, в частности окислительная деструкция белков, приводящая к увеличению их карбонильных производных. Следствием такой деструкции, в конечном итоге, является альтерация эндотелия, сопровождающаяся нарушением проницаемости сосудов и изменением их вазоактивности.

Пример 1. С-ба, 26 лет. История болезни № 31. Обследовалась амбулаторно 11.01.2001 г. Первобеременная. Д-з: беременность 5 нед., подозрение на внематочную беременность.

Определено содержание в сыворотке крови хорионического гонадотропина (ХГ) - для диагностики внематочной беременности (тест отрицательный). Проведено также определение степени окислительной деструкции белков в плазме крови по уровню карбонильных производных на спекторофотометре PV 125 1С Solar, Белоруссия (Дубинина Е.Е., Бурмистров С.О., Ходов Д.А., Поротов И.С. Окислительная модификация белков сыворотки крови человека. Методы ее определения //Вопр. Мед. химии. - 1995. - Т.41, № 1. - С.24-26).

К 0,05 мл плазмы (контрольная и опытная пробы) приливают 0,75 мл 1/15 М фосфатного буфера (рН 7,4), 0,1 мл смеси 4 мМ раствора FeSO 4 с 1 мМ раствора ЭДТА (1:1) и 0,1 мл 0,3 мМ раствора Н 2O2. После 15 мин инкубации при температуре 37°С на водяной бане в опытные пробы приливают по 1,0 мл 0,01 М раствора 2,4-ДНФГ (2,4-динитрофенилгидразин), растворенного в 2 М растворе НСl. В контрольные пробы добавляют вместо 2,4-ДНФГ равный объем 2 М раствора НСl. Для осаждения белков в каждую пробу вносят по 1 мл 20% раствора ТХУ. Пробы инкубируют при комнатной температуре в течение часа, а затем центрифугируют при 3000 g 15 мин. Далее осадок 2 раза промывают смесью этилового спирта и этилацетата в соотношении 1:1. Полученный осадок подсушивают на воздухе, а затем растворяют в 3 мл 8 М раствора мочевины. Оптическую плотность регистрируют при длине волны 363 нм. Уровень окислительной модификации белков выражают в единицах оптической плотности, отнесенных к 1 г белка.

Уровень окислительной деструкции составил 51,7 ед/г белка. Это позволило прогнозировать развитие у беременной позднего токсикоза беременности.

18.06.2001 г. беременная поступила в отделение патологии беременных. Д-з: беременность 21 нед., нефропатия II степени (гестоз ЕН). 

Данный клинический пример убедительно показывает, что повышение значений окислительной деструкции белков выше граничных свидетельствует о возможности прогнозирования гестоза.

Пример 2. Я-ко, 24 года. История болезни № 33. Наблюдалась в поликлинике РНИИАП. Д-з: беременность 5-6 нед. 6.01.2000 г. произведено взятие крови из вены, в плазме которой произведено определение окислительной деструкции белков по содержанию карбонильных групп. Уровень окислительной модификации белков соотвествовал 51,6 ед/г белка, подтверждающий ее нормальную величину. Такие показатели окислительной деструкции белков плазмы указывают на нормальное формирование хориона.

Дальнейшее наблюдение за женщиной позволило установить, что беременность и роды у нее протекали без осложнений.

Данный клинический пример свидетельствует об отсутствии гестоза при величинах окислительной деструкции ниже граничных.

По заявляемому способу обследовано 341 женщина, среди которых у 23 в сроке 4-5 нед. беременности степень окислительной деструкции белков варьировала от 51,7 ед/г белка до 83,0 ед/г белка. У 318 – величина окислительной деструкции белков была от 45,1 ед/г белка до 51,6 ед/г белка. У всех беременных с показателями модификации белков от 51,6 ед/г белка и ниже не развился гестоз. У женщин с уровнем окислительной деструкции 51,7 ед/г белка и выше имел место поздний гестоз.

Вышеизложенное подтверждает прогностическую ценность заявляемого метода.

Таким образом, заявляемый способ является более эффективным по сравнению с известным и обладает рядом преимуществ:

1. Способ высокоспецифичен (определение уровня деструкции белкового компонента клеточной мембраны эндотелия сосудов, в том числе и сосудов децидуальной оболочки и ворсин хориона, отражает степень нарушения инвазии трофобласта, лежащего в основе развития гестоза). 

2. Обладает высокой точностью. Ложноотрицательных и ложноположительных показателей - 0.

3. Выявление патологии в ранние сроки беременности, начиная с 5 недель гестации.

4. Клиническое применение способа позволит своевременно осуществлять адекватную акушерскую тактику.




ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ прогнозирования гестоза путем исследования плазмы крови беременной, отличающийся тем, что в ранние сроки (с 5 недель гестации) определяют уровень карбонильных производных белков и при величине, равной 51,7 ед оптической плотности /г белка и выше, прогнозируют развитие гестоза.