СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТЕЧЕНИЯ ГЕСТОЗА

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТЕЧЕНИЯ ГЕСТОЗА

RU (11) 2143694 (13) C1

(51) 6 G01N33/53 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 09.07.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1999.12.27 
(21) Регистрационный номер заявки: 98115819/14 
(22) Дата подачи заявки: 1998.08.17 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 1998.08.17 
(45) Опубликовано: 1999.12.27 
(56) Аналоги изобретения: 1. Витковский Ю.А. и др. О возможной роли цитокинов и нейтрофилов в патогенезе хронического ДВС-синдрома у беременных с поздним гестозом. Акушерство и гинекология. - 1998, N 3, с.13-15. 2. SU 1748066 A1, 15.07.92. 3. Справочник по акушерству и гинекологии. - М.: Медицина, 1992, с.23-29. 4. Иванов И.П. Современные подходы к решению диагностики гестозов как одного из возможных путей предупреждения их тяжелых форм. Акушерство и гинекология. - 1989, N 3, с.68-72. 
(71) Имя заявителя: Московский областной научно-исследовательский клинический институт 
(72) Имя изобретателя: Баранова И.Н.; Тягунова А.В.; Васильева З.В. 
(73) Имя патентообладателя: Московский областной научно-исследовательский клинический институт 
(98) Адрес для переписки: 129110, Москва, ул.Щепкина 61/2 МОНИКИ, патентная группа 

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТЕЧЕНИЯ ГЕСТОЗА 

Способ может быть использован в медицине, а именно в гинекологии. Проводят постановку НСТ-теста. Определяют число НСТ-положительных форм и индекс активации нейтрофилов - цитологического показателя активности (ЦПА). При выделении и определении HCT-положительных форм в выделенные лейкоциты добавляют 0,2%-ный бесцветный нитросиний тетразолий и фосфатный буфер в соотношении 1 : 1 : 1/2. При появлении более 12% HCT-положительных клеток с темноокрашенными зернами формазана и индексе активации нейтрофилов свыше 0,28 у.е. диагностируют возникновение гестоза. При получении 12,1 - 17% НСТ-положительных клеток и индекса активации 0,28 - 0,43 у.е. в 1 - 3 триместрах беременности диагностируют легкое течение гестоза. При появлении 27 - 43% НСТ-положительных клеток с индексом активации 0,67 - 1,0 у.е. диагностируют тяжелое течение гестоза, во 2-3 триместрах беременности при 18 - 26% НСТ-положительных клеток с индексом активации 0,44 - 0,66 у.е. диагностируют гестоз средней тяжести. Способ повышает точность и своевременность диагностики. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к медицине и может быть использовано при осложненном течении беременности.

Известен способ диагностики гестоза, включающий иммунологический анализ периферической крови беременных женщин с определением уровня циркулирующих иммунных комплексов и иммуноглобулинов A, G, М (ж-л: Акушерство и гинекология. 1992 г., N 1, стр. 19-21).

Недостатком этого способа является то, что получаемые данные обладают необходимой степенью точности только на фоне выраженных клинических проявлениях гестоза на начальной стадии и по ним нельзя прогнозировать течение заболевания.

Наиболее близким является способ диагностики гестоза (Акушерство и гинекология. 1998, N 3, стр. 13-15), включающий постановку НСТ-теста с определением числа НСТ-положительных форм и индекса активации нейтрофилов.

Недостатком этого способа является то, что он не позволяет наблюдать развитие гестоза.

Задача, поставленная авторами, устранить указанные недостатки.

Для этого в способе диагностики течения гестоза, включающем постановку нитросиний тетразолий(НСТ)-теста с определением числа НСТ-положительных форм и индекса активации нейтрофилов - цитологического показателя активности (ЦПА), предложено при выделении и определении НСТ-положительных форм в выделенные лейкоциты добавляют 0,2% бесцветный нитросиний тетразолий и фосфатный буфер в соотношении 1:1:1/2. При появлении более 12% НСТ-положительных клеток с темно-окрашенными зернами формазана и индексе активации нейтрофилов свыше 0,28 у. е. диагностируют возникновение гестоза, причем при получении 12,1% - 17% НСТ-положительных клеток и индекса активации -0,28-0,43 у.е. в 1-3 триместрах беременности диагностируют легкое течение гестоза, при появлении 27% - 43% НСТ положительных клеток с индексом активации 0,67 - 1,0 у. е. диагностируют тяжелое течение гестоза, во 2-3 триместрах беременности при 18% - 26% HСT положительных клеток с индексом активации 0,44 - 0,66 у.е. диагностируют гестоз средней тяжести.

В предлагаемом способе используется способность нейтрофилов, имеющих большие запасы гликогена, позволяющего этим клеткам жить в анаэробных условиях, в случае адгезии микроба или чужеродного иммункокомпетентного белка на их поверхности образовывать псевдоподии, захватывающие микробную клетку и заключающие ее в вакуоль, при этом стимулируется поверхность нейтрофила и кроме процесса фагоцитоза происходит всплеск окислительных реакции и накопление большого количества метаболитов и гидролитических ферментов, уничтожающих микроорганизмы как в клетке, так и вне ее. Это связано с резкой активацией глюкозомонофосфатного клеточного шунта и выделением большого количества кислорода, который, окисляя нитросиний тетразолий, переводит его в черные гранулы формазана.

Осуществление способа показано на конкретных клинических примерах.

Пример 1. Больная Я., 27 лет, поступила в родильный дом в 1996 г. по направлению врача женской консультации с диагнозом: Беременность 38-39 недель, головное предлежание, нефропатия I. Наследственность не отягощена. Беременность I - настоящая. I триместр протекал с явлениями раннего токсикоза: тошнота, рвота 1 раз в день. II триместр протекал без особенностей. Ill триместр: с 35 недель патологическая прибавка в весе на 500 - 900 грамм в неделю, отеки голеней. Повышение артериального давления не зафиксировано. Анализы мочи в пределах нормы. Поставлен диагноз "водянка беременных", проводилось лечение в амбулаторных условиях. Вес стабилизировался, однако отеки голеней оставались. В 38 недель впервые зафиксирован подъем давления до 140/90-130/80. На основании повышения артериального давления, наличия отеков голеней поставлен диагноз "нефропатия I". В 38-39 недель беременная госпитализирована в родильный дом. Общая прибавка в весе за беременность 13,5 кг. На момент поступления состояние удовлетворительное, головной боли нет. АД 130/80-140/90, по органам и системам без особенностей. Отеки голеней.

При поступлении в сроке 39 недель, кроме общепринятых исследований, описанных выше, производилось дополнительное обследование. Были выделены лейкоциты, для чего к 0,9 мл венозной крови, взятых в пластиковую пробирку, был добавлен 0,1 мл цитрата Na, затем произведено центрифугирование при 1500 об/мин 8 минут (можно также применять отстаивание в термостате). Из пробирки отсосали плазму, перенесли лейкоциты силиконовой пипеткой в силиконовую пробирку, где смешали с заранее приготовленным 0,2%-ным раствором нитросиний тетразолий теста (фирмы Serva, Германия) и буферным раствором в соотношении 1: 1:1/2. Для опыта необходим фосфатный буфер pH - 7,2. Для получения фосфатного буфера с pH - 7,2 готовятся 2 раствора:

Берется 1-3,12 гр. (NaH2PO42H2O) до 100 мл H2O

II - 2,63 гр. (NaH2PO42H2O) до 100 мл H2O.

Смешивают I - 20 мл; II - 80 мл.

Смесь лейкоцитов, краски и буфера в соотношении 1:1:1/2 в силиконовой пробирке оставили на 15 минут в термостате и на 15 минут при комнатной температуре. Приготовили толстый мазок, высушили на воздухе, фиксировали на огне или метанолом, окрасили 2 минуты 1%-ным раствором метиленового зеленого. Подсчитали на 100 нейтрофилов - нейтрофилы с фиолетово-черными вкраплениями и количество гранул в этих клетках. Получили:



НСТ составляет 70%, ЦПА - 1,2. Диагностируется тяжелое течение гестоза. При сроке 39-40 недель начинается родовая деятельность. В родах - припадок эклампсии. При проведении иммунологических тестов на 3 сутки после родов показатель НСТ - теста составил 40%, ЦПА -0,8. На 7 сутки после родов эти показатели составили 20% и 0,8 соответственно. После родов показатели ЦПА и HCT - теста уменьшаются по мере уменьшения клинических проявлений гестоза. В данном случае имеется наглядный пример того, что HCT - тест и ЦПА являются достоверными, тестами для определения степени тяжести гестоза, прогнозирования нарастания тяжести гестоза.

Пример 2. Больная Д., 29 лет, поступила в родильный дом 1996 г. Наследственность не отягощена. Беременность I - настоящая. I триместр протекал с явлениями раннего токсикоза: тошнота, рвота 1 раз в день. II триместр протекал без особенностей. Ill триместр: с 36 недель отеки голеней, передней брюшной стенки, лица, рук. С 37 недель повышение АД до 150/90, 160/100. При динамическом обследовании белка в моче не обнаружено. Поступила в родильный дом со сроком беременности 38 недель по направлению врача женской консультации. Общая прибавка в весе за беременность 16 кг. На момент поступления состояние удовлетворительное, головной боли нет. АД 150/90-160/90, по органам и системам без особенностей. Отеки голеней, передней брюшной стенки, рук. Повышенного питания. Имеется варикозное расширение вен нижних конечностей. При поступлении в сроке 38 - 39 недель, кроме общепринятых исследований, описанных выше, производится дополнительное обследование по методике аналогичной 1 примеру. Получили:



HСT составляет 18%, ЦПА - 0,6. Диагностируется средняя тяжесть течения гестоза. При сроке 39 недель начинается родовая деятельность рождается мальчик весом 3050 длиной 49 см с оценкой по Апгар 8/8 баллов. Послеродовой период протекает благоприятно HCT - тест составляет при обследовании в послеродовом периоде 16 процентов на 3 сутки 10 на 7 сутки ЦПА 0,4 условных единицы на 3 и 7 сутки.

Пример 3. Больная З., 31 год, доставлена бригадой скорой помощи с жалобами на преждевременное излитие вод. Беременность IV - настоящая. Первые III беременности закончились своевременными родами, без осложнений. I триместр протекал с явлениями раннего токсикоза: тошнота, рвота 1 раз в день. II триместр: при УЗИ диагностирована двойня. Ill триместр: с 35 недель отеки голеней, повышение АД до 130/80, 140/90. При динамическом обследовании белок в моче 0,065 г/л. Поступила в родильный дом со сроком беременности 36 недель, с жалобами на преждевременное излитие вод. Общая прибавка в весе за беременность 17 кг. На момент поступления состояние удовлетворительное, головной боли нет. АД 130/80-140/90, по органам и системам без особенностей. Отеки голеней. Выставляется диагноз: Беременность 36 недель, Двойня. Головное предлежание I плода, I период родов, преждевременное излитие вод. Нефропатия 1. При поступлении производится дополнительное обследование аналогично примеру 1.



НСТ составляет 17%, ЦПА - 0,4. Диагностируется легкое течение гестоза. Рождаются 2 девочки, весом 2100 и 2200, длиной 45 и 46 см, с оценкой по Апгар 7/7 и 7/8 баллов. Послеродовой период протекает благоприятно. АД снижается до 130/80. При обследовании в послеродовом периоде НСТ - тест составил 13% на 3 сутки, 10: на 7 сутки. ЦПА 0,4 и 0,3 у.е. соответственно. В данном случае имеется наглядный пример того, что НСТ - тест и ЦПА являются достоверными тестами для определения степени тяжести гестоза, прогнозировали нарастания тяжести гестоза. Таким образом, можно сделать выводы:

При нормально протекающей беременности имеется небольшое повышение активности фагоцитоза. При беременности, осложненной гестозом, показатели состояния фагоцитоза резко повышаются, причем, чем тяжелее форма гестоза, тем более выражено повышение. НСТ - тест и ЦПА при гестозах повышаются задолго до появления первых симптомов гестоза, а иногда и с самого начала беременности. В послеродовом периоде, при обследовании на 3 и 7 сутки отмечается снижение показателей НСТ - теста и ЦПА, однако при тяжелых формах гестоза до нормы эти показатели не снижаются. Таким образом, НСТ - тест и ЦПА могут служить надежными критериями при оценки степени тяжести гестоза, а также при прогнозировании развития гестоза на ранних сроках беременности.

Предлагаемый способ позволяет выявить группу риска возникновения и развития гестоза, своевременно госпитализировать и провести современные лечебные схемы ведения беременных с гестозом, что оградит мать и ребенка от осложнений в родах, инвалидизации и летальных исходов. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ диагностики течения гестоза, включающий постановку нитросиний тетразолий (НСТ)-теста с определением числа НСТ-положительных форм и индекса активации нейтрофилов, отличающийся тем, что при выделении и определении НСТ-положительных форм в выделенные лейкоциты добавляют 0,2%-ный бесцветный нитросиний тетразолий и фосфатный буфер в соотношении 1:1:1/2 и при появлении более 12% НСТ-положительных клеток с темноокрашенными зернами формазана и индексе активации нейтрофилов свыше 0,28 у.е. диагностируют возникновение гестоза, причем при получении 12,1 - 17% НСТ-положительных клеток и индекса активации 0,28 - 0,43 у.е. в 1 - 3 триместрах беременности диагностируют легкое течение гестоза, при появлении 27 - 43% НСТ-положительных клеток с индексом активации 0,67 - 1,0 у.е. диагностируют тяжелое течение гестоза, во 2 - 3 триместрах беременности при 18 - 26% НСТ положительных клеток с индексом активации 0,44 - 0,66 у.е. диагностируют гестоз средней тяжести.