СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖЕНСКИХ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ

СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖЕНСКИХ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ

RU (11) 2286799 (13) C1

(51) МПК
A61L 15/28 (2006.01)
A61F 13/15 (2006.01)
A61P 31/04 (2006.01) 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 09.07.2007 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(14) Дата публикации: 2006.11.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 2005123443/15 
(22) Дата подачи заявки: 2005.07.22 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2005.07.22 
(45) Опубликовано: 2006.11.10 
(56) Аналоги изобретения: RU 2219955 С2, 27.12.2003. RU 2248219 С2, 20.03.2005. RU 2183648 С2, 20.06.2002. RU 2236851 С1, 27.09.2004. 
(72) Имя изобретателя: Большаков Игорь Николаевич (RU); Степанова Анастасия Ивановна (RU); Перьянова Ольга Владимировна (RU); Полянская Римма Тимофеевна (RU); Баркова Анна Юрьевна (RU); Фадеева Елена Константиновна (RU); Руппель Надежда Ивановна (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Большаков Игорь Николаевич (RU) 
(98) Адрес для переписки: 660028, г.Красноярск-28, ул. Красномосковская, 1а, кв.157, И.Н.Большакову 

(54) СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖЕНСКИХ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, в частности к средствам гигиены, используемым для профилактики воспалительных заболеваний половых органов, и может быть применено в качестве антибактериального наполнителя для женской гигиенической прокладки и/или тампона на каждый день. Заявляемое изобретение направлено на решение задачи создания эффективного наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона на каждый день с целью профилактики воспалительных заболеваний наружных половых органов и обладает следующими преимуществами: абсолютная нетоксичность, профилактическое действие в случае возможного развития воспалительного процесса женских половых путей, антибактериальный эффект, избирательное действие на микрофлору женских половых органов с сохранением числа жизнеспособных полезных лактобацилл, равномерное действие на слизистые и кожные покровы наружных половых органов благодаря вязкости и высокой текучести гелевого состава, формоустойчивость гелевого состава, прозрачность и отсутствие запаха состава, отсутствие формирования антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов при ежедневных аппликациях прокладки или тампона. Указанную задачу достигают за счет того, что наполнитель в составе прокладки или тампона содержит 0,5-1% водный раствор хлоргидрата хитозана медицинского назначения (марка «М») молекулярной массы 300-700 kDa, степени дезацетилирования 89-98% при соотношении компонентов на 1000 мл состава: сухой хлоргидрат хитозан - 5-10 г, дистиллированная вода - остальное. Для нормализации вагинального биоценоза достаточно 10 аппликаций. 1 табл.




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, в частности к средствам гигиены, используемым для профилактики воспалительных заболеваний половых органов, и может быть применено в качестве антибактериального наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона на каждый день.

Известен антибактериальный состав для местного лечения бактериального вагиноза на основе 3,5% гелевой формы аскорбата хитозана, содержащей метронидазол в дозе 2 мг в 1 мл [1]. Гелевая основа хитозана в виде 3,5% концентрации удобна для введения во влагалище на тампоне при лечении воспалительных заболеваний внутренних половых органов женщины. Однако присутствие антибактериального препарата метронидазола в гелевом составе прокладки или тампона не может быть применено с целью профилактики воспалительных заболеваний даже в случае использования субтерапевтических доз антибиотика. Ограничение связано с необходимостью длительного (ежедневного) применения гигиенической прокладки или тампона и опасностью развития антибиотикоусточивых штамов микробов.

Известны способы применения 2-8% хитозанового геля в качестве противовоспалительного средства в области стоматологии при лечении глубокого кариеса в качестве лечебной прокладки [2] и при лечении деструктивных форм периодонтита в качестве хитозансодержащей пасты при введении ее в заапикальную область зуба [3].

Однако задача получения антибактериального наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона на каждый день, не содержащих антибактериальные средства, авторами не ставилась.

Известен состав на свечной или гелевой основе для нормализации внутренней микрофлоры организма с антимикробным и противовоспалительным действием, включающий сухую лиофилизированную массу живых лактобактерий, мирамистин и воду [4]. Однако хитозан в качестве гелевой основы для женской гигиенической прокладки или тампона на каждый день с целью профилактики воспалительных заболеваний авторами не применялся. Кроме того, состав гелевого наполнителя не обладает свойствами сохранения лактобациллярной микрофлоры, обязательной для нормального биоценоза тканей влагалища, включает антибиотик, способный при длительном применении вызвать формирование устойчивых штаммов микробов.

В качестве полимеров, используемых для лечения заболеваний женских половых органов, применяется коллагеновая губка «Сангвикол» после обработки тканей (псевдоэрозия шейки матки) газовым потоком плазмохимического оксида азота [5]. В составе наполнителя для женской гигиенической прокладки полимер коллаген или хитозан не применялся. Кроме того, ежедневное использование в составе наполнителя белковых препаратов нежелательно, поскольку может приводить к сенсибилизации тканей и развитию в них реакции гиперчувствительности.

Наиболее близкими к заявляемой композиции по совокупности признаков являются:

1. Биологическая композиция для лечения ран «Коллахит», содержащая так же как и заявляемое изобретение хитозан, а также антисептические препараты синтетического происхождения. Конструкция может быть выполнена в виде пленки или губки, являющихся биодеградируемыми средствами [6];

2. Повязка для лечения ран в виде пленки, содержащая так же как и заявляемое изобретение хитозан, органическую кислоту, антимикробный или антисептический препарат [7];

3. Гидроколлоидное аппликационное покрытие, содержащее так же как и заявляемое изобретение хитозан, органическую кислоту и воду [8].

Все указанные технические решения связаны с закрытием и лечением раневых дефектов, выполнены в виде губки или пленки и не предлагались в качестве наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона. Кроме того, техническое (механическое) введение указанных составов в виде пленки или губки в тканый или нетканый материал с равномерным его распределением затруднено.

Содержание сшивающих агентов в предлагаемых составах в виде эпихлоргидрина или глутаральдегида нежелательно в виду их высокой токсичности (тканевой, клеточный яд). Для лечения ран авторы [7, 8] добиваются снижения силы адгезии к раневой поверхности и силы адсорбции менее 400%, в то время как при использования наполнителя к гигиенической прокладке или тампону требуются высокая адгезия и сорбционная способность к слизистой оболочке и коже наружных половых органов.

Наполнитель для гигиенической прокладки или тампона на каждый день должен быть легко текучей консистенции, высоко адгезивен к слизистой оболочке или коже, обладать высокой сорбционной емкостью, быть прозрачным и не ухудшать эстетические характеристики изделия, обладать антибактериальными свойствами в отношении патогенной резидуальной микрофлоры влагалища и наружных половых органов, не содержать антибиотиков, сохранять лактобациллярную микрофлору влагалища, быть нетоксичным составом, легко дозироваться в малых дозах при включении в состав прокладки или тампона, быть устойчивым при хранении, не иметь запаха.

Известен российский аналог "Femina-Миксорб" ООО "БиоСорб", Новосибирск, предназначенный для лечения и профилактики гинекологических воспалительных заболеваний, как прокладка на каждый день, для использования женщиной в критические дни. Эта конструкция представляет собой целлюлозно-вискозную прокладку, содержащую углеродминеральный сорбент СУМС-1 в качестве наполнителя. Наряду с высокой способностью такого наполнителя к впитыванию влаги, неспецифическому антибактериальному и противовоспалительному эффектам у наполнителя отсутствуют обезболивающий эффект, избирательное противомикробное действие, сохранность лактобацилл, адгезия к слизистым оболочкам, биосовместимость с тканями влагалища. Имеет место умеренная цитотоксичность в результате контакта биологической жидкости влагалища с сухими гранулами наполнителя. Кроме того, при использовании сухих гранул углеродминерального сорбента (наполнителя) возникает проблема введения этого материала во влагалище в составе тампона.

Известен зарубежный аналог «Нью шин куй пао» (Китай), который предназначен при болезненных менструациях, антибактериальных и грибковых белях, для улучшения циркуляции крови в малом тазу, кровенаполнения, восстановления микрофлоры влагалища, устранения зуда влагалища и наружных половых органов, при воспалении наружных половых органов. В качестве наполнителя используются экстракты лекарственных трав. Наряду с низкой способностью наполнителя забирать влагу, умеренными противовоспалительным, антибактериальным и обезболивающим эффектами, наполнитель лишь частично сохраняет лактобациллярную микрофлору, не обладает способностью к адгезии к слизистым оболочкам половых путей, имеет травяной запах, окрашивает прокладку с помощью растительных красителей. Наполнитель не имеет устойчивой формы при хранении, не обладает биосовместимостью с тканями женских половых путей, обладает умеренной цитотоксичностью, срок хранения ограничен из-за присутствия растительного сырья.

Известны зарубежные аналоги «ALLWAYS», «LIBRESSE», «CAREFREE», «INCOGNITO», «Amelia Super Soft», «Amelia Super Dry», «OLA», предназначенные в качестве средств гигиены на каждый день, как гигиенические прокладки для поглощения биологической жидкости. Целлюлозно-вискозная основа прокладки содержит наполнитель, который представляет собой Гранулат-эйрлайт - прессованную целлюлозу. Наряду с высокой формоустойчивостью геля и высоким забором влаги, у наполнителя отсутствуют обезболивающий, противовоспалительный, антибактериальный эффекты, сохранность лактобацилл влагалища, адгезия к слизистым оболочкам половых путей, биосовместимость с биологической жидкостью влагалища.

Заявляемое изобретение направлено на решение задачи создания эффективного наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона на каждый день с целью профилактики воспалительных заболеваний наружных половых органов и обладает следующими преимуществами:

- абсолютная нетоксичность;

- профилактическое действие в случае возможного развития воспалительного процесса женских половых путей, антибактериальный эффект;

- избирательное действие на микрофлору женских половых органов с сохранением числа жизнеспособных полезных лактобацилл;

- равномерное действие на слизистые и кожные покровы наружных половых органов благодаря вязкости и высокой текучести гелевого состава;

- формоустойчивость гелевого состава;

- прозрачность и отсутствие запаха состава;

- отсутствие формирования антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов при ежедневных аппликациях прокладки или тампона.

Указанную задачу достигают за счет того, что наполнитель в составе прокладки или тампона содержит 0,5-1% водный раствор хлоргидрата хитозана медицинского назначения (марка «М») молекулярной массы 300-700 kDa, степени дезацетилирования 89-98% при соотношении компонентов на 1000 мл состава:

- сухой хлоргидрат хитозан - 5-10 г

- дистиллированная вода - остальное

Для выявления антибактериального действия наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона использовались питательные среды при культивировании микроорганизмов (МПА и 0,7% питательный агар, 2% и 0,7% бифидум-агар), образцы хитозановых гелей, клинические штаммы микроорганизмов: Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Candida albicans и референтный штамм Staphylococcus aureus 209 P, лактобациллы, входящие в состав официнального препарата «Лактобактерин сухой», красители, этиловый спирт 96%.

Антимикробные свойства были испытаны на следующих образцах хитозановых гелей:

- Образец №1 - 0,5% водный раствор аскорбата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)

- Образец №2 - 0,5% водный раствор аскорбата хитозана (молекулярная масса 250 kDa, степень деацетилирования 87%)

- Образец №3 - 0,5% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 100 kDa, степень деацетилирования 87%)

- Образец №4 - 0,5% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 70 kDa, степень деацетилирования 87%)

- Образец №5 - 0,625% раствор аскорбиновой кислоты

- Образец №6 - 0,5% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 300 kDa, степень деацетилирования 89%)

- Образец №7 - 1% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 300 kDa, степень деацетилирования 89%)

- Образец №8 - 0,5% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)

- Образец №9 - 1% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)

Антимикробный анализ осуществляют следующим образом

В стерильные чашки Петри в асептических условиях разливают МПА в объеме 15 мл. После застывания среды вторым слоем разливают 0,7% питательный агар в обьеме 4 мл с 0,1мл взвеси одной из взятых в эксперимент культур микроорганизмов в концентрации, соответствующей стандарту мутности 109. Для культивирования лактобацилл был выбран бифидум-агар, соответственно 2% 15 мл и 0,7% 4 мл. В первой серии опытов стерильным пробойником в двухслойном агаре пробивают лунки диаметром 1 см, в которые автоматической микропипеткой вносились образцы гелей в объеме 0,1 мл в лунку. Во второй серии опытов на поверхность двухслойного агара автоматической микропипеткой наносят образцы гелей в виде капель объемом 0,01мл. Для контроля стерильности образцов гелей используют двухслойный агар без взвеси микроорганизмов. Результаты оценивают через 24 и 48 часов культивирования в термостате при температуре 37°С. Результаты опытов с лактобактериями оценивают через 72 часа культивирования в эксикаторах при температуре 37°С.

Результаты исследований показали:

Образец №1.

При внесении образца в лунки наблюдался равномерный сплошной рост S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), Е.faecalis (интенсивность +++) и Е.coli (интенсивность ++++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунок. При нанесении образца на поверхность агара на фоне равномерного сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), Е.faecalis (интенсивность +++) и Е.coli (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем отмечались: отсутствие роста S.aureus 209 Р и Е.faecalis, скудный рост (интенсивность +) Е.coli. Через 48 часов результаты без изменений. В опыте с С.albicans при внесении образца в лунки на фоне равномерного сплошного роста по поверхности чашки (интенсивность +++) отмечался более интенсивный рост (++++) микроорганизмов по периферии лунки (зоны 28, 29 и 29 мм в диаметре, включая диаметр лунки). При нанесении образца на поверхность агара на фоне равномерного сплошного роста (интенсивность +++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось умеренное подавление роста микроорганизмов (+), по периферии наблюдалась зона интенсификации роста (++++) шириной 2-3 мм. Через 48 часов результаты без изменений. В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++).

Таким образом, данный образец геля оказывает бактерицидное действие на грамположительные кокки и бактериостатическое действие на грамотрицательные палочки и дрожжеподобные грибы рода Candida. При этом данный образец стимулирует рост дрожжеподобных грибов рода Candida по периферии зоны бактериостатического действия. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №2.

При внесении образца в лунки наблюдался равномерный сплошной рост S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), Е.faecalis (интенсивность +++) и Е.coli (интенсивность ++++) по всей поверхности агара. При нанесении образца на поверхность агара на фоне равномерного сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), Е.faecalis (интенсивность +++) и Е.coli (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем отмечались: скудный рост S.aureus 209 Р (интенстивность +), Е.faecalis (интенсивность +), Е.coli (интенсивность ++). Через 48 часов результаты без изменений. В опыте с С.albicans при внесении образца в лунки на фоне равномерного сплошного роста (интенсивность +++) отмечался более интенсивный рост (++++) микроорганизмов по периферии (зоны 27, 28, и 29 мм в диаметре, включая диаметр лунки). При нанесении образца на поверхность агара на фоне равномерного сплошного роста (интенсивность +++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось подавление роста микроорганизмов (++), по периферии наблюдалась зона интенсификации (++++) роста 2-3 мм. Через 48 часов - результаты без изменений. В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью ++++.

Таким образом, данный образец геля оказывает бактериостатическое действие на исследуемые культуры микроорганизмов, более выраженное в отношении грамположительных кокков. При этом данный образец стимулирует рост дрожжеподобных грибов рода Candida по периферии зоны бактериостатического действия. Уменьшение ингибирующего влияния на исследуемые микроорганизмы связано с уменьшением молекулярной массы хитозана в составе геля. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №3.

При внесении образца в лунки наблюдался сплошной равномерный рост S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), Е.faecalis (интенсивность +++), Е.coli (интенсивность ++++) и С.albicans (интенсивность +++) по всей поверхности агара. Интенсификации роста С.albicans не отмечалось. При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) и Е.faecalis (интенсивность +++), непосредственно под нанесенным гелем отмечались: скудный рост S.aureus 209 Р (интенсивность+) и Е.faecalis (интенсивность +). В опытах с Е.coli и С.albicans. - сплошной равномерный рост (интенсивность ++++ и +++ соответственно). Через 48 часов - результаты без изменений. В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью ++++.

Таким образом, данный образец геля оказывает бактериостатическое действие на грамположительные кокки и не стимулирует рост дрожжеподобных грибов рода Candida. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №4.

При внесении образца в лунки наблюдался сплошной равномерный рост S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), Е.faecalis (интенсивность +++), Е.coli (интенсивность ++++) и С.albicans (интенсивность +++) по всей поверхности агара. Интенсификации роста С.albicans не отмечалось. При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем отмечался: скудный рост (интенсивность ++). В опытах с Е.faecalis, E.coli и С.albicans - сплошной равномерный рост (интенсивность +++, ++++ и +++ соответственно).

Через 48 часов результаты - без изменений. В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью ++++. Таким образом, данный образец геля оказывает бактериостатическое действие на S.aureus 209 Р и не стимулирует рост дрожжеподобных грибов рода Candida. Прогрессирующее уменьшение ингибирующего влияния на исследуемые микроорганизмы связано с уменьшением молекулярной массы хитозана в составе геля. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №5.

Наблюдался сплошной равномерный рост S.aureus 209 Р, Е.faecalis и Е.coli (интенсивность ++++, +++ и ++++ соответственно) по всей поверхности агара независимо от способа внесения образца. Через 48 часов картина роста сохраняется. В опыте с С.albicans при внесении образца в лунки через 24 часа на фоне равномерного сплошного роста (интенсивность +++) отмечались зоны интенсификации роста (++++) с размытыми границами (приблизительно 33-34 мм в диаметре, включая диаметр лунки). Через 48 часов регистрировалось увеличение диаметра зон (до 37, 38 и 39 мм), границы их стали более четкими (пролонгирование стимулирующего влияния аскорбиновой кислоты). При нанесении образца на поверхность агара отмечалась нечеткая интенсификация роста (++++) в центре чашки и более скудный рост (+++) по периферии. В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью ++++.

Таким образом, аскорбиновая кислота стимулирует рост дрожжеподобных грибов рода Candida и не оказывает видимого влияния на другие исследуемые культуры.

Образец №6.

При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось снижение интенсивности роста до ++, через 48 часов - до +++ (т.е. сохраняется слабый бактериостатический эффект). На фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) через 24 часа отмечались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем, через 48 часов - единичные колонии (т.е. сохраняется выраженный бактериостатический эффект). На фоне сплошного роста Е.faecalis (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста, через 48 часов - картина без изменений (т.е. сохраняется бактерицидный эффект). На фоне сплошного роста С.albicans (интенсивность ++++) через 24 часа непосредственно под нанесенным гелем отмечалось снижение интенсивности роста до +++, через 48 часов сплошной равномерный рост с интенсивностью ++++ (т.е. наблюдается слабый непродолжительный бактериостатический эффект). В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью ++++.

Таким образом, данный образец геля оказывает выраженное антимикробное действие на грамположительные кокки и слабое бактериостатическое действие на Е.coli и дрожжеподобные грибы рода Candida. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №7.

При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось отсутствие роста; через 48 часов - картина без изменений (т.е. сохраняется бактерицидный эффект). На фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) через 24 часа отмечались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем, через 48 часов - картина без изменений (т.е. сохраняется бактерицидный эффект непосредственно под нанесенным гелем). На фоне сплошного роста Е.faecalis (интенсивность +++) через 24 часа отсутствие роста, через 48 часов - картина без изменений (т.е. сохраняется бактерицидный эффект). На фоне сплошного роста С.albicans (интенсивность ++++) через 24 часа отмечалось снижение интенсивности роста до ++, через 48 часов - картина без изменений (т.е. сохраняется бактериостатический эффект). В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью ++++. Таким образом, данный образец геля оказывает бактерицидное действие на грамположительные кокки и Е.coli и бактериостатическое действие на дрожжеподобные грибы рода Candida. Усиление антимикробного действия связано с увеличением концентрации хитозана. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №8.

При внесении образца в лунки наблюдался равномерный сплошной рост S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), Е.faecalis (интенсивность +++), Е.coli (интенсивность ++++) и С.albicans (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением зоны 1-2 мм по периферии лунки. Через 48 часов результаты без изменений. При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++), S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) и Е.faecalis (интенсивность +++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось отсутствие роста, через 48 часов - картина без измененний (т.е. сохраняется бактерицидный эффект). На фоне сплошного роста С.albicans (интенсивность +++) через 24 часа непосредственно под нанесенным гелем отмечалось снижение интенсивности роста (4-5 мелких колоний), через 48 часов - картина без изменений (т.е. сохраняется бактериостатический эффект).

В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью ++++.

Таким образом, данный образец геля оказывает бактерицидное действие на грамположительные кокки и Е.coli и выраженное бактериостатическое действие на дрожжеподобные грибы рода Candida. Усиление антимикробного действия связано с увеличением молекулярной массы хитозана. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №9.

При внесении образца в лунки наблюдался равномерный сплошной рост S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), Е.faecalis (интенсивность +++), Е.coli (интенсивность ++++) и С.albicans (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением зоны 1-2 мм по периферии лунки. Через 48 часов результаты без изменений. При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++), S.aureus 209 Р (интенсивность ++++), Е.faecalis (интенсивность +++) и С.albicans (интенсивность +++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось отсутствие роста, через 48 часов - картина без изменений (т.е. сохраняется бактерицидный эффект). В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью ++++.

Таким образом, данный образец геля оказывает бактерицидное действие на исследуемые культуры. Усиление антимикробного действия связано с увеличением концентрации хитозана. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

На основании проведенных исследований констатируется следующее:

1. Хитозановые 0,5-1% гели, не содержащие официнальных антибактериальных средств, оказывают (в зависимости от молекулярной массы хитозана) бактерицидное или бактериостатическое действие на грамположительные кокки (S.aureus 209 Р и Е.faecalis), и более слабое бактериостатическое действие на грамотрицательные палочки (Е.coli) и дрожжеподобные грибы рода Candida, проявляющееся у гелей с молекулярной массой хитозана не менее 300 kDa. С ростом молекулярной массы антибактериальное действие геля усиливается. Хлоргидрат хитозана с молекулярной массой 700 kDa в концентрации 1% оказывает бактерицидное действие на все выше перечисленные культуры.

2. Гели, не содержащие официнальных антибактериальных средств, не оказывают антимикробного действия на лактобациллы - основных представителей нормальной микрофлоры влагалища женщин фертильного возраста. Аскорбиновая кислота стимулирует рост дрожжеподобных грибов рода Candida за пределами зоны бактериостатического действия хитозана в связи с ее диссоциацией из полимера. Наполнитель не оказывает стимулирующего воздействия на рост дрожжеподобных грибов рода Candida.

3. Наполнитель для прокладки или тампона устойчив при хранении в течение двух лет, сохраняет гелевую консистенцию, не имеет запаха, прозрачен.

Клинические исследования антибактериального наполнителя в составе женской гигиенической прокладки и тампона были проведены на 7 женщинах. Средний возраст пациенток составил 27,5 лет. Все пациентки до начала проведения профилактического курса предложенными прокладками неоднократно проходили курс антибиотикотерапии по поводу вагинитов и бактериального вагиноза. У 5 пациенток в анамнезе хронический сальпингоофорит, одна пациентка после тотальной гистерэктомии.

Известно, что у 80% пациенток, имеющих вагинозы, отмечается рецидив заболевания в течение 9 месяцев после проведенного лечения [9]. Это во многом связано с большим числом факторов, влияющих на видовой состав вагинальной флоры. К предрасполагающим факторам, ведущим к развитию вагинозов и вагинитов, относят: применение антибиотиков, длительное применение внутриматочных контрацептивов, ранее перенесенные или сопутствующие воспалительные заболевания половых органов, нарушения гормонального статуса, изменение состояния местного иммунитета, воздействие малых доз ионизирующего излучения, стрессовые воздействия на организм, дисбактериоз в пищеварительной системе [9]. Вагинальная микроэкосистема является весьма динамичной, отличительной особенностью которой, является строгая эстрогензависимость [10]. При уменьшении эстрогенного влияния, снижается количество гликогена, содержащегося в многослойном плоском эпителии влагалища, являющегося необходимым субстратом для индигенной молочнокислой флоры. Это приводит к уменьшению количества палочек Дедерлейна во влагалище, повышается рН вагинального секрета, снижается колонизационная резистентность, при этом создаются благоприятные условия для активации условно-патогенной микрофлоры, вызывающей патологический процесс во влагалище.

Развитие бактериального вагиноза и вагинита требует применения антибиотиков, что нередко приводит к развитию антибиотикорезистентных штаммов, а также еще более глубокому нарушению вагинальной микроэкологии. Известно также, что после применения антибиотиков антианаэробного спектра действия, с одной стороны, резко возрастает количество таких вагинальных условно-патогенных микроорганизмов как Е.coli, Enterococcus spp. и других, а с другой - сохраняется, а в ряде случаев усугубляется, дефицит индигенной лакто- и бифидофлоры [9].

До проведения профилактического курса субъективные и объективные признаки заболевания отсутствовали.

В качестве критериев эффективности профилактического лечения использовали гинекологическое исследование (осмотр в зеркалах), бактериологическое исследование (микроскопия вагинальных мазков с предварительной окраской по Грамму, бактериологическое исследование вагинальной микрофлоры с определением чувствительности к антибиотикам методом дисков) до лечения, на 5, 10 дни лечения и спустя месяц после проведенного курса.

У всех пациенток при гинекологическом исследовании отсутствовали признаки воспаления слизистой оболочки влагалища. Выделения молочного цвета, в небольшом количестве.

При исследовании вагинального мазка у всех пациенток обнаружен промежуточный тип биоценоза (по классификации Е.Ф.Кира и С.В.Черкасова). В мазке умеренное или сниженное количество лактобактерий, грамположительные кокки и грамотрицательные палочки. В умеренном количестве обнаружены лейкоциты, моноциты, эпителиальные клетки.

При бактериологическом исследовании у 43% пациенток обнаруживается Bacteroides fragilis, у 29% - Echerichia coli, у 14% - Staphilococcus aureus, у 14% - Fusobacterium nucleatum. При определении чувствительности к антибиотикам выявлена антибиотикоустойчивость к эритромицину у 43%, метронидазолу у 29%, клиндамицину у 14% пациенток, офлоксацину у 14% пациенток. Данные препараты широко используются в гинекологической практике как в качестве монотерапии, так в составе некоторых комплексных препаратов.

Лечение пациенток осуществляют следующим образом: в манипуляционном кабинете вагинально на тампоне вводят 1% гель хлоргидрата хитозана в количестве 5 мл и выдавали прокладку, содержащую данный гель в количестве 5 мл, для аппликации на наружные половые органы. Тампон и прокладку оставляли на 6 часов.

Гель легко наносится на тампон и прокладку, хорошо впитывается и не растекается по поверхности. При хранении органолептические свойства геля не изменялись. Гель имеет прозрачный, слабо соломенный цвет, слегка опалесцирует, без запаха. Хранить гель можно при комнатной температуре в темном месте.

При проведении лечения существенно изменяется состав вагинального секрета. Увеличивается количество лактобактерий, отсутствует грамотрицательная микрофлора, число лейкоцитов 1-2 в поле зрения, эпителиальные клетки единичные. Состав вагинального секрета в динамике представлен в таблице.

Характеристика вагинального содержимого в динамике профилактического курса лечения (%)

Таблица 
Состав вагинального секрета До лечения 5 дней лечения 10 дней лечения Через 1 месяц после лечения 
Эпителиальные клетки сплошь 100 86 14 29 
Единичные клетки эпителия - 14 86 71 
Лейкоциты единичные в п/зр. - 14 86 71 
Лейкоциты более 10 в п/зр 100 86 14 29 
Палочки Дедерлейна более 150 в п/зр. - 29 100 86 
Умеренное количество палочек Дедерлейна. 100 71 - 14 


Как видно из таблицы, уже на 5 день лечения увеличилось на 14% количество мазков с единичным содержанием лейкоцитов и эпителиальных клеток, с содержанием палочек Дедерлейна - на 29%.

На 10 день лечения у всех пациенток вагинальный секрет соответствовал нормоценозу. Увеличилось количество мазков с единичным содержанием эпителиальных клеток и лейкоцитов на 86%, с содержанием палочек Дедерлейна в большом количестве (более 150 в п/зр.) на 100%.

При исследовании роста культур на питательных средах установлено, что у одной пациентки с ростом Staphilococcus aureus до лечения отмечен рост нормальной микрофлоры после лечения, у остальных пациенток спектр микрофлоры не изменился, поскольку данные представители являются компонентами нормальной вагинальной микрофлоры. Это свидетельствует об избирательности воздействия геля на вагинальную микрофлору, поскольку уменьшается количество условно-патогенной микрофлоры, увеличивается содержание молочнокислых бактерий, которые поддерживают колонизационную резистентность. Не изменился и спектр антибиотикорезистентности.

Таким образом, для достижения стойкой нормализации вагинального биоценоза достаточно 10 аппликаций.

Спустя месяц после проведенного курса количество вагинальных мазков с единичным содержанием эпителиальных клеток и лейкоцитов снизилось на 15%, у одной пациентки в вагинальном секрете палочки Дедерлейна были в умеренном количестве. У остальных пациенток полученный положительный эффект был стойким и остался без изменений.

Поскольку предложенный гель не содержит в своем составе антибактериальных препаратов и его использование не изменяет спектра антибиотикорезистентности, наполнитель можно использовать ежедневно в составе женской гигиенической прокладки и тампона с целью поддержания вагинального нормоценоза. Особенно это касается женщин, имеющих факторы риска развития вагинозов и вагинитов. Также рекомендуется применение данных прокладок сразу после менструации, поскольку в этот период значительно снижается эстрогенное влияние, вагинальная среда смещается в щелочную сторону.

При проведении профилактического курса ни у одной из пациенток не было никаких осложнений (аллергические реакции, развитие воспалительного процесса). Данный гель является безопасным для использования благодаря хорошей биосовместимости и биодеградабельности.

Клинический пример: пациентка Е. 23 года, в течение 4 лет страдала бактериальным вагинозом, неоднократно по этому поводу проходила курсы лечения антибиотиками как per os, так per vaginum. При этом лечебный эффект сохранялся в среднем 2-3 месяца.

Пациентку периодически беспокоили обильные выделения из половых путей слизистого характера, с неприятным запахом «тухлой рыбы», усиливающимся после полового акта, подмывания. Из анамнеза известно, что у пациентки имеется хронический сальпингоофорит с 16 лет. Менструация по типу олигоменореи, дисменореи. Последняя менструация 7 дней назад. Месяц назад лечилась вагинальными свечами, содержащими антибиотик по поводу бактериального вагиноза.

При гинекологическом исследовании признаков воспаления не обнаружено, выделения молочного цвета, умеренные.

При исследовании состава вагинального секрета обнаружен промежуточный тип нормоценоза. В мазке - эпителиальные клетки более 10 в поле зрения, лейкоциты - 12 в поле зрения, грамотрицательные палочки в небольшом количестве, палочки Дедерлейна - до 40 в поле зрения.

При бактериологическом исследовании обнаружен рост Bacteroides fragilis, в концентрации, допустимой во влагалище. При исследовании антибиотикочувствительности обнаружена устойчивость к метронидазолу.

Лечение проводят следующим образом: ежедневно в процедурном кабинете вводят тампон, содержащий 5 мл 1% хлоргидрата хитозана, и прокладку, пропитанную 5 мл этого же геля, для аппликации на наружные половые органы. Тампон и прокладку оставляют на 6 часов.

Состав вагинального секрета изменился на 5 сутки лечения: в мазке увеличилось количество палочек Дедерлейна - 100 в п/зр, лейкоциты до 5 в п/зр, эпителиальные клетки 3-4 в п/зр, отсутствовали грамотрицательные палочки.

При исследовании вагинального состава на 10 сутки после лечения микроскопическая картина мазка соответствовала нормоценозу. В мазке обильное количество палочек Дедерлейна (более 150 в п/зр.), лейкоциты, эпителиальные клетки единичные, отсутствовали грамотрицательные палочки.

При исследовании роста культуры на питательной среде установлен менее интенсивный рост Bacteroides fragilis (+), чувствительность к антибактериальным препаратам не изменилась, сохранилась антибиотикорезистентность только к метронидазолу.

Спустя месяц после прохождения профилактического курса, при гинекологическом исследовании признаки воспаления слизистой оболочки влагалища отсутствуют. Выделения молочного цвета в небольшом количестве. В вагинальном мазке палочек Дедерлейна более 150 в п/зр., отсутствовали грамотрицательные палочки, лейкоциты, эпителиальные клетки единичные.

Таким образом, выделен перспективный образец гелевого наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона на каждый день - 0,5-1% водный раствор хлоргидрата хитозана с молекулярной массой 300-700 kDa и степенью дезацетилирования не менее 89%, обладающий антибактериальным эффектом с пролонгирующими свойствами, высокой текучестью и дозируемостью, сохранением лактобациллярной микрофлоры влагалища, формоустойчивостью, прозрачностью геля и отсутствием запаха, не вызывающий формирование антибиотикоустойчивости при ежедневной аппликации.

Источники информации

1. Патент РФ №2236851, БИПМ №27, 2004 г.

2. Патент РФ №,2228164, БИПМ №13, 2004 г.

3. Патент РФ №2229858, БИПМ №16, 2004 г.

4. Патент РФ №2212889, БИПМ №27, 2003

5. Патент РФ №2217150, БИПМ №33, 2003.

6. Патент РФ №2108114, БИПМ №10, 1998 г.

7. Патент РФ №2219954, БИПМ №36, 2003.

8. Патент РФ №2219955, БИПМ №36, 2003.

9. Коршунов В.М., Володин Н.Н, Ефимов Б.А. и др. Микроэкология влагалища. Коррекция микрофлоры при вагинальных дисбактериозах. Москва. - 1999.- С.1-15.

10. Сидорова И.С., Воробьев А.А., Боровкова Е.И. Микробиоценоз половых путей женщин репродуктивного возраста. Ж. Акушерство и гинекология, 2005. - №2, С.7-9.




ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ профилактики воспалительных заболеваний женских половых органов путем использования гигиенической прокладки и/или тампона на каждый день, содержащих наполнитель, отличающийся тем, что наполнитель представляет собой 0,5-1% гидрогель хлоргидрата хитозана молекулярной массы 300-700 кДа и степени дезацетилирования не менее 89%, в объеме 5 мл.