ИЗОБРЕТЕНИЕ
Патент Российской Федерации RU2258222
СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ БЫСТРОРАСТУЩЕЙ ЛЕЙОМИОМЫ МАТКИ
Документ: В формате PDF 
(14) Дата публикации: 2005.08.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 2003125893/14 
(22) Дата подачи заявки: 2003.08.25 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2003.08.25 
(43) Дата публикации заявки: 2005.02.20 
(45) Опубликовано: 2005.08.10 
(56) Аналоги изобретения: ICHIMURA Т., KAWAMURA N. ITO F., SHIBATA S., MINAKUCHI К., TSUJIMURA A., UMESAKI N., OGITA S., Correlation between the growth of uterine leiomyomata and estrigen and progesterone receptors in needle biopsy speciments // Fertil. Steril., 1998, v.70, p.967-971. RU 2199124 C1, 23.05.2001. RU 2000121978 A, 10.08.2002. 
(72) Имя изобретателя: Посисеева Л.В. (RU); Малышкина А.И. (RU); Красильникова А.К. (RU); Сотникова Н.Ю. (RU); Анциферова Ю.С. (RU); Перетятко Л.П. (RU) 
(73) Имя патентообладателя: ГУ "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова" МЗ РФ (RU) 
(98) Адрес для переписки: 153731, г.Иваново, ул. Победы, 20, ГУ "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова" МЗ РФ

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ БЫСТРОРАСТУЩЕЙ ЛЕЙОМИОМЫ МАТКИ

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано в качестве дифференциальной дооперационной диагностики быстрорастущей лейомиомы матки. Исследуют биологический материал. При этом определяют содержание эпидермального фактора роста в биоптатах эндометрия. При его значении, равном 6 нг/мл и менее, диагностируют «ложный» рост миомы, а при значении более 6 нг/мл - «истинный» рост миомы. Способ позволяет проводить дооперационную диагностику быстрорастущей лейомиомы матки по определению содержания эпидермального фактора роста (ЭФР) в биоптатах эндометрия.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано в качестве дифференциальной дооперационной диагностики быстрорастущей лейомиомы матки.

Актуальность изобретения определяется высокой частотой встречаемости лейомиомы (в дальнейшем - миомы матки) у женщин старше 30 лет: 15-17%. До 80% всех случаев заболевания наблюдается у женщин репродуктивного возраста [7]. У 50% больных имеет место быстрый рост миомы матки, что является показанием к операции, хотя часть из них могла быть пролечена консервативно с использованием гормональных препаратов. 

В практической деятельности различают два варианта роста быстрорастущей миомы матки - «ложный» и «истинный» [6].

При «истинном» росте миомы матки имеется пролиферация миогенных элементов, что может успешно поддаваться гормональному лечению [2].

«Ложный» рост миомы в основе имеет нарушение питания узла, отек, дегенеративные изменения в опухоли, за счет чего и происходит увеличение размеров миоматозного узла, что требует преимущественно оперативного лечения [1; 2; 6].

В настоящее время отсутствуют достоверные критерии дифференциальной диагностики характера быстрого роста миомы матки без гистологического исследования удаленного органа, что не позволяет врачу выбрать оптимальную тактику ведения больной.

Известен способ диагностики морфологического типа миомы матки путем проведения цветного допплеровского картирования (ЦДК), заключающегося в том, что саркома миоматозного узла, в отличие от других форм, имеет интенсивный характер неоваскуляризации, с центральным и периферическим, хаотичным расположением сосудов, низким уровнем резистентности кровотока [4].

Недостатки способа:

1) способ основан на дифференциальном диагнозе саркомы и лейомиомы матки, тогда как частота малигнизации миомы матки составляет не более 0,8% [9];

2) способ неинформативен в плане дифференциального диагноза «истинного» и «ложного» роста миомы;

3) способ неспецифичен, т.к. характер внутриопухолевого кровотока при саркомах и пролиферирующей миоме идентичен;

4) отсутствуют данные о точности способа.

Наиболее близким по техническому решению к заявляемому способу является способ прогнозирования роста миомы матки, заключающийся в том, что в тканях миоматозных узлов, получаемых методом трансцервикальной пункционной биопсии, иммуногистохимическим методом предлагается определять плотность и интенсивность окрашивания рецепторов к прогестерону, и при увеличении этих показателей прогнозируется рост миомы в течение 12 месяцев [11].

Данный способ был выбран нами в качестве ближайшего аналога. Однако он имеет ряд недостатков:

1) плохая воспроизводимость результатов в связи с погрешностями при приготовлении срезов, неоднородным по интенсивности окрашиванием тканей, особенностями микроскопии [3];

2) необходимость использования дорогостоящей аппаратуры (гистероскоп или аппарат ультразвуковой диагностики с необходимостью применения трансвагинального датчика) и привлечения высококвалифицированного персонала для получения и обработки ткани миоматозных узлов); 

3) высокая инвазивность и травматичность;

4) авторы не указывают точность, чувствительность и специфичность способа. 

Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Заявляемый технический результат достигается тем, что в биоптате эндометрия женщин с быстрорастущей миомой матки определяют содержание эпидермального фактора роста (ЭФР), и при значениях этого показателя, равных 6 нг/мл и менее, диагностируют «ложный» рост лейомиомы матки, а при значениях более 6 нг/мл - «истинный», с точностью 82,1%.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается дифференциальная дооперационная диагностика быстрорастущей лейомиомы матки по определению содержания эпидермального фактора роста (ЭФР) в биоптатах эндометрия.

ЭФР - глобулярный белок, который действует как сильный митоген в клетках различных типов. ЭФР найден в крови, цереброспинальной жидкости, молоке, слюне, желудочном и панкреатическом соках [5]. ЭФР изучался с целью возможного участия в патогенезе возникновения и роста миомы матки. Ранее было установлено, что ЭФР индуцирует митотическую активность в неизмененном миометрии и непосредственно в узле [8]. Не имеется данных по содержанию ЭФР в эндометрии у женщин с быстрорастущей миомой матки и с данной целью его определение проводится впервые.

Способ осуществляется по стандартной методике следующим образом: для исследования продукции ЭФР мононуклеарными клетками (МНК) эндометрия выделяют обогащенную фракцию МНК эндометрия стандартным безферментативным механическим методом [10]. Биоптаты эндометрия помещаются в холодный физиологический раствор, забуференный фосфатами, дважды отмываются в Среде 199, механически измельчаются и фильтруются через 6 слоев марли. Полученная таким образом суспензия эндометриальных клеток отражает реальное содержание клеток в эндометрии. Выделение обогащенной популяции эндометриальных лимфоцитов осуществляется стандартным методом скоростного центрифугирования в градиенте плотности фиколл-верографина (d=1,078). Мононуклеарные клетки собираются в интерфазе Среда 199 - фиколл-верографин и дважды отмываются в Среде 199 в течение 10 минут. Жизнеспособность клеток определяется окрашиванием трипановым синим, и она составляла не менее 95%. Для культивирования использовали полученную фракцию МНК эндометрия в концентрации 2×10 6 кл/мл. Клетки культивируются в течение 24 часов при 37°С в среде RPMI 1640 с 2 мМ глутамином без стимуляции. После окончания срока культивации супернатант (СН) удаляется, центрифугируется, замораживается и хранится при - 20°С.

Определение концентрации эпидермального фактора роста в супернатантах МНК эндометрия проводится методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с помощью коммерческих тест-систем «ACCU-CYTE» производства CYTIMMUNE (Maryland, USA). Предел чувствительности тест-системы составляет 0,195 нг/мл. Измерение проводится на микропланшетном ридере Multiscan EX (Labsystems, Finland) при длине волны 490 nm. Расчет концентрации производится в нг/мл. 

Использование предлагаемого способа позволяет с высокой точностью (82,1%) провести дифференциальную диагностику типа роста миомы матки.

Отличительными признаками способа являются: 

- установлен дифференциально-диагностический параметр содержания эпидермального фактора роста (ЭФР) у женщин с быстрорастущей миомой матки в эндометрии, при количественных значениях которого 6 нг/мл и менее диагностируется «ложный» рост миомы, а при значениях более 6 нг/мл - «истинный».

Существо заявляемого способа поясняется следующими примерами:

Пример 1. Больная Я., 30 лет, поступила на плановое оперативное лечение. Наблюдалась в женской консультации по поводу миомы матки малых размеров (6 недель) в течение 3 лет. В течение последнего года наблюдения стала предъявлять жалобы на увеличение объема живота, обильные и длительные менструации, частое мочеиспускание. В анамнезе 1 своевременные роды, медицинских абортов не было, метод контрацепции - барьерный.

При влагалищном исследовании: шейка матки без дефектов слизистой, матка увеличена до 16 недель беременности, с неровной поверхностью, плотная, подвижная, безболезненная, придатки не определяются, своды свободны.

По данным ультразвукового сканирования (УЗС): тело матки размерами 78×52×61 мм неоднородной структуры. Из правого ребра исходит межмышечно-подбрюшинный узел 132×92×120 мм на широком основании, пониженной эхогенности, неоднородной структуры. М-эхо 12 мм. Правый яичник - 41×26 мм, левый яичник - 44×26 мм, нормальной структуры. 

Анализ крови: Hb - 110 г/л, эритроциты - 4,3 Т/л, цветной показатель - 0,9, лейкоциты - 6,7 Г/л, эозинофилы - 2, сегментоядерные нейтрофилы - 62, моноциты - 8, лимфоциты - 26, СОЭ - 11 мм/ч. 

Клинический диагноз: межмышечно-подбрюшинная миома матки, быстрый рост, дизурические явления.

По данным иммунологического обследования по заявляемому способу установлено, что содержание ЭФР в эндометрии в пределах 2,39 нг/мл, что ниже заявляемого параметра (6 нг/мл) и указывает на «ложный» рост миомы.

Заключение: диагностируется «ложный» рост миомы.

Произведена операция: консервативная миомэктомия.

При гистологическом исследовании операционного материала получен следующий результат: «лейомиома матки с выраженным отеком и очаговым гиалинозом стромы». Таким образом, диагноз «ложного» роста миомы матки, связанного с вторичными изменениями опухоли, подтвердился.

Пример 2. Больная С., 32 года, поступила на плановое оперативное лечение. Наблюдалась в женской консультации по поводу миомы матки малых размеров (4-5 недель). При осмотре через три месяца после первого обращения отмечен быстрый рост миоматозного узла. Жалоб больная не предъявляла. Из анамнеза: женщина нерожавшая, медицинских абортов не было, метод контрацепции - барьерный. В дальнейшем планирует беременность.

При осмотре: шейка матки без дефектов слизистой, тело матки увеличено до 11 недель беременности за счет узла, исходящего из левой боковой стенки, плотное, подвижное, безболезненное, придатки не изменены.

Данные УЗС: тело матки неоднородной структуры, вместе с узлом размерами 115×70×110 мм. На передней стенке межмышечно-подбрюшинный узел диаметром до 70 мм. М-эхо 4 мм. Правый яичник - 36×18 мм. Левый яичник - 33×11 мм. Оба яичника нормальной структуры.

Анализ крови: Hb - 120 г/л, эритроциты - 4,2 Т/л, цветной показатель - 0,9, лейкоциты - 8 Г/л, палочкоядерные нейтрофилы - 1, сегментоядерные нейтрофилы - 55, моноциты - 8, лимфоциты - 35, СОЭ - 6 мм/ч.

Клинический диагноз: межмышечно-подбрюшинная миома матки. Быстрый рост.

Обследование по заявляемому способу показало, что содержание ЭФР в эндометрии составило 15,04 нг/мл, что выше заявляемого параметра (более 6 нг/мл) и указывает на «истинный» рост миомы.

Заключение: диагностируется «истинный» рост миомы, не связанный с ее вторичными изменениями.

Произведена операция: консервативная миомэктомия.

При гистологическом исследовании операционного материала получен ответ «пролиферирующая лейомиома матки с большим количеством сосудов разного калибра», т.е. выявлены признаки «истинного» роста.

Пример 3. Больная К., 30 лет. Наблюдалась в женской консультации по поводу миомы матки малых размеров (6 недель) в течение 3 лет. В течение последнего полугода наблюдения стала предъявлять жалобы на обильные и длительные менструации. В анамнезе 1 своевременные роды, медицинских абортов не было, метод контрацепции - внутриматочная спираль (ВМС) в течение 5 лет. При влагалищном исследовании: шейка матки без дефектов слизистой, матка увеличена до 11 недель беременности, с неровной поверхностью, плотная, подвижная, безболезненная, придатки не определяются, своды свободны.

По данным ультразвукового сканирования (УЗС): тело матки размерами 67×93×100 мм неоднородной структуры. На передней стенке, слева, межмышечно-подбрюшинный узел 80×65×81 мм с вторичными изменениями. М-эхо 11 мм. Правый яичник - 40×24 мм, левый яичник - 32×27 мм, нормальной структуры.

Анализ крови: Hb - 120 г/л, эритроциты - 4,34 Т/л, цветной показатель - 0,81, лейкоциты - 4,4 Г/л, эозинофилы - 2, сегментоядерные нейтрофилы - 64, моноциты - 11,2, лимфоциты - 40,2, СОЭ - 10 мм/ч.

Клинический диагноз: межмышечно-подбрюшинная миома матки, быстрый рост.

По данным иммунологического обследования по заявляемому способу показано, что содержание ЭФР в эндометрии составило 6,2 нг/мл, что несколько выше заявляемого параметра (6 нг/мл) и указывает на «истинный» рост миомы.

Заключение: диагностируется «истинный» рост миомы.

Произведена операция: консервативная миомэктомия.

При гистологическом исследовании операционного материала получен следующий результат: «лейомиома матки с умеренным количеством сосудов и фиброзом стромы». Таким образом, выявлены признаки не только «истинного», но и «ложного» роста миомы матки.

Преимущества заявляемого способа: 

1. Использование дифференциальной дооперационной диагностики быстрорастущей миомы матки в качестве скринингового метода обследования с точностью - 82,1%, чувствительностью - 94,4%, специфичностью - 60% (таблица 1).

2. Обследование женщин возможно в амбулаторных условиях, не требует привлечения многочисленного персонала и не приводит к временной утрате трудоспособности женщины.

3. Возможность выбора тактики ведения больных.

Таблица 1 
Показатель Количество обследованных 
всего женщин 28 
истинно-положительный результат 17 
ложно-положительный результат 4 
истинно-отрицательный результат 6 
ложно-отрицательный результат 1 
Итого: 
точность заявляемого способа - 82,1% 
чувствительность заявляемого способа - 94,4% 
специфичность заявляемого способа - 60% 


СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Вихляева Е.М. Адъювантная терапия при миоме матки // Вестник РАМН. - 1997. - №2. - с.16-20.

2. Вихляева Е.М. О модели гормонального канцерогенеза на примере лейомиомы матки: проблемы и перспективы // Журнал акушерства и женских болезней. - 2001. - №1. - с.13-17.

3. Иммунологические методы (под редакцией Х.Фримеля). // М.: Мир. - 1979. - 518 с. 

4. Капустина И.Н., Сидорова И.С. Значение цветного допплеровского картирования в оценке типа миомы матки. // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2001. - №1. - С.27-32.

5. Пальцев М.А., Иваново А.А. Межклеточные взаимодействия. - М.: Медицина, 1995. - 224 с.

6. Савицкий Г.А., Савицкий А.Г. Миома матки (проблемы патогенеза и патогенетической терапии). - СПб.: »Элби-СПб», 2000. - 130 с.

7. Сидорова И.С., Караулов А.В., Курашвили Ю.Б. К вопросу о патогенезе «ложного роста» миомы матки у женщин репродуктивного возраста. //Вестник Российской ассоциации акушеров-гинекологов. - 1998. - №4. - С.86-88.

8. Сидорова И.С., Рыжова О.В. Роль факторов роста в патогенезе миомы матки // Акуш. и гин. - 2002. - №1. - С.12-13.

9. Тихомиров А.Л., Лубнин Д.М. Роль микрососудистых изменений в механизме маточных кровотечений у больных лейомиомой матки. // АГ-инфо. - 2000. - №1. - С.5-7. 

10. Boyum A. Isolation of mononuclear cell and granulocytes from human blood and bone marrow // Scand. J. Clin. Lad. Invest. -1968. - V.21. - №97. - Р.77.1.

11. Ichimura Т., Kawamura N., Ito F., Shibata S., Minakuchi K., Tsujimura A., Umesaki N., Ogita S. Correlation between the growth of uterine leiomyomata and estrigen and progesterone receptors in needle biopsy speciments // Fertil. Steril. - 1998. - V.70. - P.967-971.




ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ дифференциальной диагностики быстрорастущей лейомиомы матки путем исследования биологического материала, отличающийся тем, что в биоптате эндометрия определяют содержание эпидермального фактора роста и при его значении 6 нг/мл и менее диагностируют «ложный» рост миомы, а при значении более 6 нг/мл - «истинный» рост миомы