Способ выявления форм трихомонад

Недостатком данных способов является то, что они не позволяют выявлять атипичные формы трихомонад, в частности при посеве крови, которые, проявляя низкую метаболическую активность, с трудом размножаются на питательных средах.

Технический результат предлагаемого способа заключается в выявлении атипичных форм трихомонад за счет добавления в питательную среду сыворотки крови человека или лошади и увеличения времени проводимой инактивации сыворотки с 5 до 30 минут в три этапа, что активирует пролиферативную активность клеток простейших.

Данный результат достигается тем, что в питательную среду добавляют стрессовый фактор - биологически активное вещество - сыворотку крови человека или лошади мало инактивированную, что способствует активному размножению путем почкования или шизогонии амебовидных, цистоподобных или различных неправильных, без ядерных и неподвижных форм трихомонад, обладающих низкой метаболической активностью.

ПРЕДЛАГАЕМЫЙ СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЮТ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Кровь, взятую из вены пациента, не менее 2,0 мл смешивают с 15 Ед/мл гепарина и разливают в центрифужные пробирки, в количестве не более 1 мл в каждую. Пробы центрифугируют 20-30 минут при 3000 об/мин. После надосадочную жидкую часть - плазму сливают, а осадок в количестве 0,5 мл пипеткой Пастера засевают в 4 мл питательной среды. Первый пассаж атипичных форм получают на питательной среде Тераса с добавлением в качестве стрессового и обогащающего фактора сыворотки крови человека или лошади, инактивированную в течение 5-10 минут при температуре +56°С. В целях подавления сопутствующей микрофлоры в среду добавляют антибиотики в количестве 500 Ед/мл пенициллин, стрептомицин и нистатин, что является дополнительным стрессовым фактором.

Культуру инкубируют 2 суток при температуре +37°С под слоем вазелинового масла для создания анаэробных условий. Далее делают пересев на аналогичную среду, но содержащую меньший стрессовый фактор: частично инактивированную сыворотку крови человека или лошади (в течение 15-20 минут) и антибиотики в количестве 250 Ед/мл. Пробы инкубируют при температуре +37°С. Через 2 суток производят третий пассаж культуры на среду, не содержащую стрессовых факторов: антибиотиков и с полностью инактивированной сывороткой крови (время инактивации 30 минут при температуре +56°С). Пробы инкубируют при температуре +37°С в течение 2 суток. Далее осуществляют еще 1-2 пересева культуры на среду, также не содержащую стрессовых факторов. Такое длительное пассирование дает возможность выделения чистой культуры трихомонад, содержащей максимальное количество различных типичных и атипичных форм в виде беловатой придонной взвеси.

Предлагаемый способ обеспечивает культуральную диагностику атипичных - округлых и амебовидных, а также различных измененных неправильной формы трихомонад: гантелевидных, бисквитовидных и других, различных по размеру, даже если они присутствуют в клиническом материале в единичном количестве. Это происходит под действием слабо инактивированной сыворотки крови человека или лошади, которая является стрессовым фактором, что вызывает активное размножение трихомонад путем почкования или шизогонии с целью самосохранения.

Данный способ имеет важное значение при диагностике генерализованной формы трихомониаза, когда инфекция протекает асимптомно и латентно, а возбудитель имеет атипичную форму с низкой метаболической активностью, которую трудно обнаружить при обычных культуральных способах диагностики.

Пример 1

Больная Киричева Р.А., возраст 64 года.

Диагноз: c-r colon. В анамнезе трихомонадный кольпит. Для лечения назначались протистоцидные препараты. После первого пассажа при посеве крови обнаружено трихомонад 36×10⁵ клеток/мл. После 5 пересевов в питательной среде количество трихомонад возросло до 280×10⁵ клеток/мл. Следовательно, у больной выявлены живые типичные и атипичные формы трихомонад.

Пример 2

Больная Безрученкова А.А., возраст 67 лет.

Диагноз: c-r sigmae. В анамнезе трихомонадный кольпит. Для лечения назначались протистоцидные препараты. После первого пассажа при посеве крови обнаружено трихомонад 18×10⁴ клеток/мл. После 5 пересевов в питательной среде роста не наблюдалось, а количество трихомонад уменьшалось. Следовательно, у больной выявлены дегенеративные, разрушающиеся формы трихомонад.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ выявления форм трихомонад, включающий посев биологического материала в питательную среду, содержащую инактивированную сыворотку крови человека или лошади и антибиотики, отличающийся тем, что производят посев крови в питательную среду Тераса с добавлением сыворотки крови человека или лошади, инактивированной в течение 5-10 мин при температуре +56°С, и антибиотиков в количестве 500 Ед/мл - пенициллин, стрептомицин и нистатин; затем культуру инкубируют 2 суток при температуре +37°С, делают пересев на аналогичную среду, но содержащую сыворотку крови человека или лошади, инактивированную в течение 15-20 мин, и антибиотики в количестве 250 Ед/мл, осуществляют повторную инкубацию в течение 2 суток при температуре +37°С; затем делают пересев на среду, содержащую сыворотку, инактивированную 30 мин, без добавления антибиотиков, и инкубируют пробы при температуре +37°С в течение 2 суток, далее осуществляют еще 1-2 пересева на среду, с полностью инактивированной сывороткой крови человека или лошади и без добавления антибиотиков, и по происходящему активному почкованию или шизогонии судят о наличии живых атипичных форм трихомонад, а при отсутствии размножения - о дегенеративных, разрушающихся формах.

Разместил статью: admin
Дата публикации:  27-03-2012, 23:26

html-cсылка на публикацию		⇩ Разместил статью ⇩ Фомин Дмитрий Владимирович  Его публикации  Нужна регистрация Отправить сообщение
BB-cсылка на публикацию
Прямая ссылка на публикацию

Огромное Спасибо за Ваш вклад в развитие отечественной науки и техники!